鉗夾法制備貓急性眼外肌損傷模型的研究.pdf

1、急性眼外肌損傷是臨床上常見(jiàn)的眼病，常由于外傷、代謝性疾病等引起，造成神經(jīng)、肌肉、血管等的損傷導(dǎo)致一條或多條眼外肌運(yùn)動(dòng)受限，往往形成麻痹性斜視，出現(xiàn)復(fù)視和代償頭位。眼外肌損傷所引起的這些癥狀和體征不僅影響患者的形象外觀(guān)，同時(shí)由于復(fù)視等亦影響其正常工作和生活。急性眼外肌損傷的治療主要是藥物治療和必要時(shí)進(jìn)行手術(shù)矯正斜視和復(fù)視，但尚無(wú)系統(tǒng)和規(guī)范的治療方式。由于目前對(duì)急性眼外肌損傷的研究缺乏合適的動(dòng)物模型，制約了對(duì)其發(fā)生發(fā)展、疾病轉(zhuǎn)歸、藥物及手術(shù)

2、治療等的研究。
　　在我們前期的兔眼眼外肌損傷模型的研究中，嘗試使用鉗夾法制備急性眼外肌損傷的兔模型，在一定程度上可供急性眼外肌損傷的基礎(chǔ)和臨床研究（2010WOC,Berlin）。但兔眼模型尚存在不足，如使用鉗夾時(shí)間來(lái)控制損傷程度類(lèi)似于缺血再灌注損傷而不完全符合外傷性急性損傷、無(wú)法進(jìn)行眼位的觀(guān)察等，不能滿(mǎn)足急性眼外肌損傷的發(fā)病機(jī)制、功能改變和藥物防治的深入研究。貓是額面化的動(dòng)物，雙眼的聯(lián)合視野與人類(lèi)接近，能夠進(jìn)行眼位的觀(guān)察。因此

3、，本研究擬在原有眼外肌損傷模型研究的基礎(chǔ)上，應(yīng)用鉗夾法進(jìn)行貓急性眼外肌損傷模型的制備，以期能夠更好地反映和評(píng)價(jià)眼外肌損傷，為研究眼外肌損傷的發(fā)病機(jī)制和藥物防治提供合適的動(dòng)物模型。
　　目的：利用鉗夾法制備貓急性眼外肌損傷模型，為急性眼外肌損傷病理機(jī)制及治療方法的研究提供模型。
　　方法：家貓72只，隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F六組，每組12只，以30mg/kg體重腹腔注射1％戊巴比妥鈉溶液麻醉動(dòng)物后，通過(guò)實(shí)施手術(shù)的方法分離

4、出左眼外直肌，然后用12.5cm直型細(xì)針（小血管）持針器直視下分別以2kg（A、D組）、4kg（B、E組）、6kg（C、F組）大小的鉗夾力鉗夾貓左眼外直肌造成損傷，右眼不做處理作為對(duì)照。每組的6只貓分別于術(shù)后第4d（A、B、C組）及第7d（D、E、F組）利用眼底血管造影儀拍攝貓雙眼眼底像，通過(guò)投射法測(cè)量貓眼眼位斜視度的方法以觀(guān)測(cè)眼位；測(cè)量眼位之后，分別于第4d（A、B、C組）、第7d（D、E、F組）將貓?zhí)幩?，取雙眼外直肌標(biāo)本進(jìn)行HE染色

5、、電鏡切片以觀(guān)察肌肉損傷后的病理變化，并進(jìn)行增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）和肌球蛋白重鏈（MHC）免疫組織化學(xué)染色；每組的其余6只貓分別于第4d（A、B、C組）、第7d（D、E、F組）在活體上分離出外直肌，連接于生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，設(shè)定起始刺激強(qiáng)度為0V，頻率100Hz，刺激次數(shù)100次，增量為0.05V及0.5V，雙眼分別測(cè)定，比較眼外肌損傷后肌力的改變。
　　結(jié)果：在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察各實(shí)驗(yàn)組貓外直肌損傷的HE染色病理切片，可觀(guān)察到較

6、正常對(duì)照組出現(xiàn)不同程度的肌纖維斷裂、壞死和肌漿溶解，損傷后4d主要表現(xiàn)為炎性浸潤(rùn)、出血水腫及變性壞死等；損傷后7d主要表現(xiàn)為水腫減輕，纖維組織增生；鉗夾力為2kg、4kg、6kg所造成的肌肉損傷分別符合肌肉損傷Ⅱ度中輕度、中度、重度損傷標(biāo)準(zhǔn)。電鏡觀(guān)察下，主要表現(xiàn)為肌漿網(wǎng)擴(kuò)張，肌小節(jié)模糊、連接斷裂，Z線(xiàn)、H帶及明暗帶結(jié)構(gòu)破裂、雜亂，肌絲排列紊亂，線(xiàn)粒體增生、空泡樣改變等。PCNA及MHC免疫組化染色可證實(shí)損傷區(qū)的肌纖維增殖，在高倍鏡下進(jìn)行

7、PCNA陽(yáng)性細(xì)胞核計(jì)數(shù)，損傷各組的陽(yáng)性細(xì)胞核比例均較正常對(duì)照組升高，其平均陽(yáng)性率約為17.83％；損傷后各組貓的外直肌表現(xiàn)出對(duì)電刺激閾值的升高，同時(shí)較對(duì)側(cè)外直肌肌力明顯下降；第4d，A組（557.333±206.507mg）與B組（283.167±91.777mg）、C組（169.167±60.261mg）的肌力之間有差別（F=12.559，P<0.05）；而第7d，D組（360.833±113.118mg）、E組（392.667±15

8、4.859mg）、F組（536±311.995mg）三組間的肌力差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.169，P>0.05）；鉗夾傷后第4、7d各實(shí)驗(yàn)組貓的眼位觀(guān)測(cè)均提示眼位較術(shù)前均有不同程度的向內(nèi)偏斜，分別為A組（13.3°±5.785°）、B組（23.3°±4.476°）、C組（16.7°±9.973°）、D組（11.3°±4.885°）、E組（15.0°±5.745°）、F組（15.2°±4.535°），但除A組與B、C組之間有差別（F=3.

9、015，P<0.05）外，其余各組間兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.006，P>0.05）。
　　結(jié)論：鉗夾法可制備出貓急性眼外肌損傷模型，并可以按照需要制作不同的病理?yè)p傷分級(jí)，為進(jìn)一步研究眼外肌損傷的病理變化、疾病轉(zhuǎn)歸、藥物治療等提供了穩(wěn)定的模型。
　　創(chuàng)新點(diǎn):
　　1、首次采用鉗夾法制作出貓急性眼外肌損傷模型，并進(jìn)行了眼外肌損傷的病理分級(jí)，為進(jìn)一步研究其機(jī)制和藥物治療等研究提供了穩(wěn)定和可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　2