JNK-MCP-1信號通路在姜黃素抗糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的機制研究.pdf

1、目的:觀察JNK/MCP-1通路在姜黃素抗大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛(DNP)中的作用及機制。
　　 方法:雄性SD大鼠給予高脂高糖喂養(yǎng)8周后產(chǎn)生胰島素抵抗，腹腔以35mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)注射，三天后血糖≥16.7 mmol/l大鼠入選Ⅱ型糖尿病大鼠組（D組），注射STZ14d后測得機械縮足閾值(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)測得的值設(shè)定為基礎(chǔ)值，低于基礎(chǔ)值的85％以下者為Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠模型建立，將其隨機分

2、為6組(n=27):Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性痛組（DNP組）、DNP+姜黃素100kg/kg/d組（Cur組）、DNP+姜黃素溶劑對照組（DSC組）、DNP+JNK抑制劑組（DJ組）、DNP+JNK抑制劑溶劑對照組(DJS組)、MCP-1激動劑組(DM組)。鏈唑霉素注射后14d，Cur組、DSC組分別給予腹腔注射姜黃素（100mg/kg/d）或玉米油(4ml/kg/d)，DJ組、DJS組、DM組鞘內(nèi)分別給予JNK抑制劑（10μl/d/rat

3、、0.5μg/μl）、DMSO(10μl/d/rat)、MCP-1激動劑（10μl/d/rat、1ng/μl）。另取27只給予普通飼料喂養(yǎng)的大鼠為對照組(C組)，給藥后3、7、14d時測定機械縮足痛閾(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)，并在同一時間點取脊髓腰膨大及L4-6背根神經(jīng)節(jié)(DRG)，用免疫組化測定脊髓和DRG中的MCP-1和p-JNK，用ELISA測定脊髓和DRG中的MCP-1含量，用Western Blotting測定脊髓和

4、DRG中的p-JNK含量。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠血糖、胰島素濃度及胰島素敏感指數(shù)的變化與C組比較，飼養(yǎng)8周后血糖水平較C組增高但未達到糖尿病診斷標準(C組:3.56±0.11 mmol/l,D組:5.48±0.38 mmol/l)，空腹胰島素濃度有明顯增高(C組:13.22±0.77μIU/L，D組:16.71±1.41μIU/L)，胰島素敏感指數(shù)出現(xiàn)明顯下降（C組-3.85±0.07，D組-4.51±0.10）

5、。
　　 2.大鼠痛閾的變化造模前各組MWT、TWL基礎(chǔ)值無差別。與C組相比，造模后DNP組、Cur組、SC組、DJ組、DJS組、DM組MWT降低、TWL縮短;與DNP組相比，Cur組、DJ組給藥后7、14天后MWT明顯升高、TWL明顯延長，DM組在給藥后出現(xiàn)顯著下降;DSC組、DJS組與DNP組相比在給藥后各時間點MWT、TWL差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3.脊髓背角及DRG相關(guān)蛋白測定
　　 3.1 p-JNK

6、:與C組相比，其他各組在造模后大鼠脊髓背角和DRG中p-JNK蛋白表達有顯著升高。與DNP組相比，給藥后7d、14d Cur組、DJ組、DM組脊髓背角及DRG p-JNK蛋白表達明顯減少。DJS組和DSC組與DNP組p-JNK蛋白表達基本一致，兩組無統(tǒng)計學(xué)差異。免疫組化與western-blot結(jié)果一致。
　　 3.2 MCP-1:與C組相比，其他各組在造模后的大鼠脊髓背角和DRG中MCP-1蛋白表達比C組有明顯升高，與DNP組

7、相比，給藥后的7d、14d Cur組、DJ組脊髓背角及DRG中MCP-1蛋白表達有明顯減少，DM組有明顯升高。DJS組、DSC組與DNP組相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異。免疫組化與ELISA結(jié)果相一致。
　　 結(jié)論:DNP大鼠脊髓背角和DRG MCP-1、p-JNK表達增多;腹腔注射姜黃素能有效緩解DNP大鼠的熱痛敏和機械痛敏。鞘內(nèi)注射JNK抑制劑可以明顯減輕痛覺過敏，并引起下游MCP-1的表達下降。同時鞘內(nèi)注射MCP-1激動劑可明顯增加痛