半導(dǎo)體量子點單克隆抗體熒光探針的制備及對細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)分子的檢測.pdf

1、目的：用最大發(fā)射波長分別605nm、525nm的半導(dǎo)體量子點(semiconductor quantum dots QDs)分別與Smad4、Smad2單克隆抗體偶聯(lián)后制備成水溶性的分子探針。并檢測兩種量子點在偶聯(lián)前的光學(xué)性質(zhì)、對大鼠牙乳頭細(xì)胞(rat dental papillae cells，RDPCs)的生物相容性及偶聯(lián)后分子探針的光學(xué)性質(zhì)和生物識別特異性。 方法：①選擇剛出生3天的新生SD大鼠，取出磨牙牙胚，分離牙乳頭，

2、用酶消化法培養(yǎng)SD大鼠牙乳頭細(xì)胞，用波形絲蛋白和細(xì)胞角蛋白免疫化學(xué)染色鑒定細(xì)胞來源，觀察細(xì)胞的生長規(guī)律；②把605QDs、525QDs及兩種量子點等濃度的混合物按3種不同濃度與RDPCs共同培養(yǎng)，觀察QDs對RDPCs生長和形態(tài)的影響；③用MTT法檢測不同濃度的605QDs、525QDs及兩種量子等濃度的混合物對RDPCs的毒性作用。④用化學(xué)偶連法制備水溶性的605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針并純化；⑤測定6

3、05QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針的吸收光譜、發(fā)射光譜并用激光共聚焦顯微鏡對605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針的光學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測;⑥TGF-β1和大鼠牙乳頭細(xì)胞共同孵育24h后，采用SP免疫細(xì)胞化學(xué)法和605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針直接免疫熒光成像法觀察比較Smad4、Smad2在大鼠牙乳頭細(xì)胞內(nèi)的分布，并檢測細(xì)胞內(nèi)605QDs-Smad4、525QD

4、s-Smad2單抗熒光探針的光學(xué)性質(zhì)。 結(jié)果：①：體外培養(yǎng)的RDPCs生長良好，波形絲蛋白染色陽性而細(xì)胞角蛋白染色陰性。②不同濃度的605QDs、525QDs及兩種量子點的等濃度混合物對體外培養(yǎng)的RDPCs沒有毒性作用，對其生長和形態(tài)也沒有影響。③605QDs、525QDs分別與Smad4、Smad2單抗通過共價結(jié)合形成穩(wěn)定的605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針，605QDs-Smad4、525QDs-

5、Smad2單抗熒光探針對大鼠牙乳頭細(xì)胞內(nèi)Smad4分子仍具有特異性的識別能力；605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針仍具有QDs所具有的激發(fā)光譜寬，發(fā)射光譜窄，熒光度強(qiáng)，光化學(xué)穩(wěn)定性好等光學(xué)特征。 結(jié)論：①605QDs、525QDs及兩種量子點等濃度的混合物在一定的濃度范圍內(nèi)對RPDCs具有良好的生物相容性，為605QDs、525QDs在活體生理條件下用于活細(xì)胞內(nèi)的多通道信號研究提供了科學(xué)的證據(jù)。②生物修