阿托伐他汀與吡格列酮對糖尿病動脈粥樣硬化Wistar大鼠主動脈組織因子表達的影響.pdf

1、背景 組織因子(tissuefactor，TF)富含于動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)，在急性冠脈綜合征病人斑塊破裂、血栓形成的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著至關(guān)重要的啟動作用。粥樣斑塊的成份決定了它的穩(wěn)定與否，其中不穩(wěn)定斑塊纖維帽薄，富含脂質(zhì)和大量炎癥細胞，滲入斑塊內(nèi)的單核細胞、巨噬細胞及淋巴細胞受炎癥介質(zhì)刺激表達大量的TF，使不穩(wěn)定斑塊內(nèi)TF含量增高，易于破裂。斑塊破裂后形成血栓，導致冠狀動脈完全或是不完全性阻塞，從而產(chǎn)生冠狀動脈的急性事件。影響斑塊T

2、F表達和功能已成為抗栓治療的新靶點。2型糖尿病(type2diabetesmellitus，T2DM)是一種嚴重影響人類生命健康的疾病，而大血管并發(fā)癥又是導致T2DM患者死亡的最主要原因。T2DM大血管病變的基本病理變化是動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)，主要涉及血脂及血纖溶系統(tǒng)紊亂、血管內(nèi)皮損傷等方面，亦有TF表達異常。 阿托伐他汀是臨床上常用的降脂藥物，大量的臨床實踐表明，它能延緩冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生和

3、發(fā)展，尤其對糖尿病合并冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronaryheartdisease，CHD)的預防和治療有重要意義，但對高血糖下動脈粥樣硬化斑塊中TFmRNA表達的影響罕見報道。吡格列酮是新型的降糖藥物，同時具有心血管保護作用，其機制可能與其抗炎作用有關(guān)，但是否對TFmRNA表達有影響仍不清楚。目前，國際上關(guān)于阿托伐他汀和吡格列酮聯(lián)合應(yīng)用是否有益的研究也正處在臨床試驗階段。 目的 本研究試圖建立糖尿病動脈粥樣硬化大

4、鼠模型，通過觀察模型中大鼠主動脈TFmRNA表達水平的變化，探討這兩種藥物在高血糖、高血脂的情況下對血糖、血脂代謝及TFmRNA表達的影響。 方法和內(nèi)容 1、采用煙酰胺腹腔注射與鏈脲佐菌素尾靜脈注射聯(lián)合維生素D3分次灌胃、高脂飼料喂養(yǎng)的方法建立糖尿病動脈粥樣硬化Wistar大鼠模型，以血糖、胰腺及主動脈常規(guī)形態(tài)學檢查作為評價此動物模型建立成功的指標，對大鼠主動脈進行TF免疫組織化學染色，觀察其在動脈粥樣硬化斑塊中的分布，

5、并測定不同處理組成模大鼠主動脈組織TFmRNA表達。 2、分組以注射生理鹽水的大鼠作為對照組。成模大鼠隨機分為陽性對照組、阿托伐他汀組(A組)、吡格列酮組(B組)、聯(lián)用組(C組)。 3、藥物干預阿托伐他汀、吡格列酮單獨及兩藥聯(lián)合干預4周。 4、大鼠血糖、胰島素、血脂含量測定全自動生化儀檢測空腹血糖、胰島素、血脂水平。 5、總RNA提取與半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(semi-quantitativereve

6、rsetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR)實驗結(jié)束時將各組動物處死，立即分離主動脈，剝離外膜，PBS沖洗管腔，每50mg～100mg主動脈加入1mlTrizol抽提液提取總RNA。設(shè)計大鼠TF引物，對照引物使用“管家基因”GAPDH。應(yīng)用圖像處理系統(tǒng)測定平均光密度值。 結(jié)果 1、糖尿病動脈粥樣硬化大鼠模型出現(xiàn)持續(xù)的高血糖(對照組5.56±0.41模型組9.88±3.15

7、)、高胰島素(對照組13.98±2.81模型組26.89±5.63)、高膽固醇(對照組1.59±0.30模型組19.26±6.96)、高甘油三酯(對照組0.77±0.14模型組1.42±0.41)和動脈粥樣硬化改變(主動脈病理改變：內(nèi)膜明顯增厚，血管壁向管腔內(nèi)突出，血管內(nèi)皮細胞排列紊亂，可見膽固醇結(jié)晶的棱形裂隙及粉染壞死組織，內(nèi)膜下有大量泡沫細胞聚集，中膜增生明顯，平滑肌細胞排列不規(guī)則，結(jié)構(gòu)紊亂)。 2、主動脈TF免疫組織化學染

8、色顯示：TF在動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)皮細胞、炎癥細胞胞漿和脂質(zhì)池上均有強陽性著色。 3、用藥前后比較，阿托伐他汀可以改善糖尿病動脈粥樣硬化大鼠的高胰島素血癥(用藥前30.09±3.76，用藥后23.07±3.13，P=0.001)；降低總膽固醇(用藥前23.08±4.43，用藥后13.53±2.78，P=0.000)、甘油三酯(用藥前0.94±0.25，用藥后0.52±0.17，P=0.001)、低密度脂蛋白(用藥前8.38±1.4

9、7，用藥后3.88±0.79，P=0.000)，升高高密度脂蛋白(用藥前0.40±0.08，用藥后0.64±0.21，P=0.017)；對空腹血糖差異無顯著性意義(用藥前9.00±1.111，用藥后8.09±0.92，P=0.093)。 4、用藥前后比較，吡格列酮可以降低糖尿病動脈粥樣硬化大鼠的胰島素(用藥前30.29±3.12用藥后23.23±3.76，P=0.001)、總膽固醇(用藥前17.70±5.36，用藥后12.01±

10、2.93，P=0.013)、低密度脂蛋白(用藥前6.93±1.74，用藥后4.68±1.68，P=0.013)，對甘油三酯(用藥前0.77±0.14，用藥后0.70±0.16，P=0.401)和高密度脂蛋白(用藥前0.60±0.19，用藥后0.44±0.15，P=0.078)差異無顯著性意義，空腹血糖的降低未達到顯著性界限(用藥前9.02±1.08，用藥后8.21±0.79，P=0.084)。 5、用藥前后比較，兩藥聯(lián)用可降低胰

11、島素(用藥前28.66±4.40，用藥后23.22±4.82，P=0.023)、總膽固醇(用藥前19.45±8.28，用藥后12.47±5.01，P=0.046)、低密度脂蛋白(用藥前7.78±3.77，用藥后3.67±0.92，P=0.001)，對空腹血糖(用藥前10.54±3.84，用藥后8.57±2.08，P=0.194)、甘油三酯(用藥前0.80±0.13，用藥后0.71±0.21，P=0.309)、高密度脂蛋白(用藥前0.44

12、±0.15，用藥后0.58±0.23，P=0.165)差異無顯著性意義。 6、阿托伐他汀、吡格列酮單獨及聯(lián)合應(yīng)用均可以減低實驗性糖尿病動脈粥樣硬化大鼠主動脈TFmRNA水平(陽性對照組為：1.19±0.21；用藥后各組分別為：0.68±0.21，0.71±0.17，0.66±0.16，P=0.000)。 結(jié)論 1、煙酰胺腹腔注射與鏈脲佐菌素尾靜脈注射聯(lián)合維生素D3分次灌胃、高脂飼料喂養(yǎng)的方法，可建立糖尿病動脈粥樣