2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、1988年Giguere以雌激素受體DNA結(jié)合域(DBD)的cDNA為探針,采用低嚴(yán)謹(jǐn)雜交技術(shù)篩選人cDNA文庫(kù)得到了一種新的受體,命名為雌激素相關(guān)受體(ERRs)。ERRs是一種孤兒核受體,至今尚未鑒定出相應(yīng)的配體。經(jīng)多年的研究顯示,ERRs在胚胎發(fā)育、真核生物基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞的生長(zhǎng)與癌變以及骨形成與重塑等方面發(fā)揮重要作用。ERRe參與了骨形成及骨質(zhì)疏松的發(fā)生<'[1]>。 本室在人肺癌細(xì)胞A549中利用mammalian

2、two hybrid assay篩選到能夠有效抑制蛋白質(zhì)活性的植物性雌激素單體物質(zhì),該單體能夠通過ERRot有效的抑制肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此,為深入研究植物性雌激素通過ERRα對(duì)人肺癌細(xì)胞的抑制作用,我們檢測(cè)了細(xì)胞的生長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞是否凋亡進(jìn)行了判斷,并進(jìn)行了ROS等各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定。利用體外合成的針對(duì)ERRα小干擾RNA對(duì)人肺癌細(xì)胞A549進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),并檢測(cè)某些基因的表達(dá);利剛慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)特異性沉默人肺癌細(xì)胞A549中ERR

3、α基因的表達(dá),包裝病毒并成功侵染目的細(xì)胞,從而進(jìn)一步分析該基因沉默后對(duì)肺癌細(xì)胞的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,加入我們利用mammalian two hybrid assay篩選出的植物性雌激素單體(濃度為10uM)24小時(shí)后,能夠明顯抑制人肺癌細(xì)胞A549的生長(zhǎng),細(xì)胞表現(xiàn)出凋亡的特征,形態(tài)表現(xiàn)為細(xì)胞縮小、核斷裂、質(zhì)膜出芽、凋亡小體形成的細(xì)胞死亡。生長(zhǎng)曲線顯示細(xì)胞增殖明顯受到抑制,48小時(shí)后抑制效應(yīng)達(dá)到60%,繼續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞幾乎停止生

4、長(zhǎng)。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行ROS的檢測(cè),48小時(shí)后與對(duì)照組相比加入植物性雌激素單體(濃度為10μM)的ROS升高了2倍。 體外合成的針對(duì)ERRα小干擾RNA對(duì)人肺癌細(xì)胞A549進(jìn)行轉(zhuǎn)染后,利用real time PCR技術(shù)檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá),PDK4基因表達(dá)量一定程度上受劍了抑制。于是建立了慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù),從而達(dá)到沉默目的基因的作用,進(jìn)而組裝具有沉默功能的病毒,利用病毒侵染肺癌細(xì)胞A549檢測(cè)基因沉默后對(duì)細(xì)胞的影響,為以后的研究

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