膽紅素對(duì)大鼠頸上交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞乙酰膽堿受體通道電流的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：重度黃疸患者交感神經(jīng)興奮性降低，并且自主神經(jīng)功能下降與血漿膽紅素濃度相關(guān)。交感神經(jīng)通過(guò)突觸前釋放乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)作用于突觸后煙堿型乙酰膽堿受體(nicotinicacetylcholinereceptors，nAChRs)通道調(diào)控節(jié)后纖維末端的遞質(zhì)（兒茶酚胺）釋放，從而調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)功能。頸上交感神經(jīng)節(jié)(superiorcervicalganglia，SCG)細(xì)胞上的nAChRs在突觸信息的加工、處理

2、和傳遞過(guò)程中起重要作用。因此我們研究膽紅素對(duì)SCG上nAChRs通道電流的影響以闡明黃疸患者自主神經(jīng)功能降低的機(jī)制。
　　 方法：將SD大鼠(5-12d)斷頭，快速取出SCG，放入含Ⅰ型膠原酶、蛋白酶E和脫氧核糖核酸酶的氧飽和的31.5℃孵育液中消化25-40min，之后用吸管將消化好的神經(jīng)元細(xì)胞打散，獲取單個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞，將其放置培養(yǎng)皿30min，灌流液沖洗后行膜片鉗實(shí)驗(yàn)。所有的電生理測(cè)量均在室溫(22-25℃)下通過(guò)全細(xì)胞膜片

3、鉗記錄模式進(jìn)行，玻璃電極采用P-97微電極拉制儀四部法拉制而成。利用微操縱儀將玻璃電極放置在神經(jīng)元上，當(dāng)封接阻抗大于1GΩ時(shí)吸破電極腔內(nèi)細(xì)胞膜，形成全細(xì)胞封接，補(bǔ)償電阻。給與鉗制電壓-60mV，濾波1KHz，記錄乙酰膽堿受體通道電流。不同濃度的ACh和膽紅素等通過(guò)自制Y型快速加藥系統(tǒng)于細(xì)胞旁給藥。實(shí)驗(yàn)所用灌流液中含有1umol/L阿托品，以阻止毒蕈堿受體的活化。數(shù)據(jù)采用PatchMaster和Origin8.0軟件進(jìn)行分析。結(jié)果以均數(shù)±

4、標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，配對(duì)資料t檢驗(yàn)，p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：在鉗制電壓-60mV下，ACh濃度依賴(lài)性的誘發(fā)一快速激活且快速衰減的內(nèi)向電流即乙酰膽堿受體電流(ACh-inducedcurrents，IACh)。低濃度(0.5μmol/L)膽紅素使100μmol/L的ACh誘發(fā)的IACh增加1.13(P＜0.05)倍，脫敏感衰減率降低8.63％(P>＞0.05)；而高濃度(5.0μmol/L)膽紅素使100μmo

5、l/L的ACh誘發(fā)的IACh分別降低72.61%(P＜0.05)，脫敏感衰減率分別降低96.49%(P＜0.05)。4μM膽紅素干預(yù)下，100、200、400、800μM的ACh誘發(fā)電流的波幅分別為635.37±172.72、1669.67±177.02、4370.86±206.25和6916.9±73.66(pA)。Forskolin（PKA活化劑）使100μMACh誘發(fā)的相對(duì)IACh波幅由0.44±0.11降低到0.30±0.96(

6、p＜0.05)，相對(duì)脫敏感衰減率由0.05±0.07增加到0.30±0.29(p＜0.05)；而H-89（PKA抑制劑）使100μMACh誘發(fā)的相對(duì)IACh峰值由0.38±0.05增加到0.43±0.08(p＞0.05)，相對(duì)脫敏感衰減率由0.004±0.002增加到0.014±0.003(p＞0.05)。
　　 結(jié)論：膽紅素以可逆性恢復(fù)的方式影響SCG細(xì)胞IACh。低濃度膽紅素明顯增強(qiáng)IACh，其機(jī)制可能與降低其通道脫敏感衰減