上皮根鞘和上皮剩余在牙齒發(fā)育過(guò)程中的生物學(xué)性狀和作用研究.pdf

1、赫特威爾氏上皮根鞘(HERS)是牙根發(fā)育中的決定性結(jié)構(gòu)，是牙根發(fā)育過(guò)程中上皮一間充質(zhì)所發(fā)生的一系列交互信號(hào)誘導(dǎo)得以實(shí)現(xiàn)的重要且唯一的上皮性結(jié)構(gòu)。斷裂后的HERS細(xì)胞部分轉(zhuǎn)移到了牙周膜內(nèi)聚集成條索或簇形成上皮剩余(ECRM)，在牙齒發(fā)育完成后的牙周組織中一生都存在。HERS及其斷裂后產(chǎn)物上皮剩余在牙根發(fā)育特別是牙骨質(zhì)發(fā)育和牙周組織內(nèi)環(huán)境維系中的可能發(fā)揮重要作用，因此，上皮根鞘和上皮剩余的具體生物學(xué)性狀及作用研究可能為解決牙周再生的瓶頸一牙

2、骨質(zhì)再生提供了新的希望和途徑。 本課題研究上皮根鞘細(xì)胞的發(fā)生，非膠原基質(zhì)蛋白骨橋素(OPN)、骨涎蛋白(BSP)及牙骨質(zhì)發(fā)育之間關(guān)系。觀察牙根發(fā)育中上皮根鞘斷裂后結(jié)局和增殖凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，探討上皮根鞘在牙根發(fā)育特別是牙骨質(zhì)形成中的可能作用。追蹤觀察上皮剩余在牙齒萌出和建<牙合>過(guò)程中的形態(tài)分布和細(xì)胞活性改變，從而探討上皮剩余在牙根發(fā)育特別是牙骨質(zhì)形成過(guò)程中的可能功能。 方法： 不同發(fā)育期SPF級(jí)BALB/C小

3、鼠(山東大學(xué)動(dòng)物中心提供)96只。戊巴比妥鈉(3﹪，3mg/100g)腹腔麻醉后新鮮配置4﹪多聚甲醛循環(huán)內(nèi)固定30 min，分離雙側(cè)下頜骨4℃下再固定24h、10﹪EDTA脫鈣30-60d，梯度乙醇脫水、石蠟包埋，近遠(yuǎn)中向5gm連續(xù)切片，行HE和免疫組化染色。 1．光鏡觀察 細(xì)胞角蛋白14(CK14)標(biāo)記上皮根鞘和上皮剩余細(xì)胞。建立牙根發(fā)育和牙周組織發(fā)育模型，光鏡下，觀察牙根發(fā)育過(guò)程中，上皮根鞘的發(fā)生、延伸及牙骨質(zhì)的形成

4、；觀察上皮根鞘的斷裂與上皮剩余的形成，建殆期上皮剩余的形態(tài)及分布改變。 2．超微結(jié)構(gòu)觀察透射電鏡觀察牙根發(fā)育不同階段上皮根鞘和上皮剩余細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。 3．細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖活性檢測(cè)TUNEL(TUNEL)法原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)牙根發(fā)育中上皮根鞘和上皮剩余細(xì)胞凋亡的情況。細(xì)胞增殖采用PV免疫組化兩步法檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)在兩種細(xì)胞中的表達(dá)。 4．免疫組化檢測(cè)凋亡基因和骨形成相關(guān)蛋白的表達(dá)PV免疫組化兩步法檢

5、測(cè)凋亡抑制基因Bcl-2、OPN、BSP在牙根發(fā)育中各組織中的表達(dá)。 5．計(jì)算機(jī)三維重建上皮剩余在建殆期的形態(tài)和布局。 6．統(tǒng)計(jì)分析采用Newman-Keuls法計(jì)算建<牙合>前期、建<牙合>期及建<牙合>后期上皮剩余細(xì)胞數(shù)量差異是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，取α=0.05水準(zhǔn)。 結(jié)論： 1．上皮根鞘發(fā)生時(shí)，內(nèi)外釉上皮間可包容個(gè)別源于網(wǎng)狀層或中間層的含豐富細(xì)胞器的細(xì)胞，從而形成類(lèi)似成釉器的結(jié)構(gòu)，其可能在牙根發(fā)育起始

6、階段分泌某些蛋白和信號(hào)分子啟動(dòng)根部牙本質(zhì)和牙骨質(zhì)的形成。此外，OPN不僅是牙骨質(zhì)的基質(zhì)蛋白，在牙本質(zhì)牙骨質(zhì)界形成中可能也具有一定作用。 2．HERS細(xì)胞的凋亡可能會(huì)為成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化提供信號(hào)，部分HERS細(xì)胞可能參與牙骨質(zhì)的形成。 3．建<,牙合>期上皮剩余包繞牙根的特殊布局及其在建殆過(guò)程中的形態(tài)和細(xì)胞活性改變提示上皮剩余不是僅僅作為無(wú)功能的“剩余物”，其可能是上皮根鞘功能的衍伸或持續(xù)，在建<,牙合>過(guò)程中發(fā)揮積極作用從