慢性難愈創(chuàng)面細(xì)菌生物膜體外模型的建立及分析.pdf

1、目的：建立慢性難愈創(chuàng)面臨床常見細(xì)菌的生物膜體外模型，利用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)菌生物膜形成過程，探索細(xì)菌生物膜檢測的有效手段。方法：(1)建立細(xì)菌生物膜體外模型，摸索生物膜體外模型的建立條件，首先將傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)法與引導(dǎo)片培養(yǎng)法進(jìn)行比較，在此基礎(chǔ)上，以引導(dǎo)片法體外培養(yǎng)生物膜，觀察不同時(shí)間點(diǎn)和溫度對生物膜形成的影響。(2)激光共聚焦顯微鏡觀察各菌株生物膜形成過程。采用FITC-ConA和碘化丙啶(PI)分別標(biāo)記多糖和細(xì)菌DNA，激光掃描共

2、聚焦顯微鏡觀察生物膜形成情況。結(jié)果：(1)傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)法最終測得的結(jié)果穩(wěn)定性較差，引導(dǎo)片培養(yǎng)法最終所得的結(jié)果較穩(wěn)定，試驗(yàn)重復(fù)性較好，37℃時(shí)生物膜的生長狀態(tài)較22℃更好。(2)CLSM觀察可見，培養(yǎng)24h時(shí)，各菌株均有散在的綠色熒光，不密集。48h時(shí)綠色熒光明顯增多，部分與紅色熒光重疊，形成視野中黃色熒光，金黃色葡萄球菌明顯。在綠色熒光的強(qiáng)度和分布上，臨床菌株明顯多于標(biāo)準(zhǔn)株。培養(yǎng)72h時(shí)銅綠假單胞菌和其標(biāo)準(zhǔn)株的綠色熒光增多。培養(yǎng)5d時(shí)