冠心病氣虛血瘀證的臨床特征及益氣活血法干預(yù)的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 本研究以臨床最常見的冠心病氣虛血瘀證為研究對象，從文獻(xiàn)、臨床和實驗三方面探討其證候的臨床特征及益氣活血法干預(yù)機(jī)制，為提高臨床辨證治療水平提供研究依據(jù)。
　　 方法:
　　 1. 文獻(xiàn)研究:
　　 采用文獻(xiàn)搜集、整理、分析和總結(jié)的方法,對冠心病氣虛血瘀證病機(jī)、辨證（包括辨證標(biāo)準(zhǔn)、計量診斷、客觀化）、氣虛血瘀證動物模型及冠心病氣虛血瘀證證治等多方面進(jìn)行研究。
　　 2. 臨床研究:

2、>　　 （1）通過對冠心病中醫(yī)證候展開流行病學(xué)調(diào)查，應(yīng)用主成分分析、Logistic 回歸模型及分析等方法,歸納冠心病心氣虛血瘀證證型分布特征，并比較其與心血瘀阻證、心氣虧虛證的臨床癥征組成特點；應(yīng)用逐步回歸多因素分析方法對冠心病氣虛血瘀證相關(guān)危險因素進(jìn)行分析。
　　 （2）以健康人和冠心病氣滯血瘀證病人為對照,從臨床實驗指標(biāo)（包括面色、舌質(zhì)、甲色和脈象及其微觀指標(biāo)）方面對冠心病氣虛血瘀證進(jìn)行同步對照觀察分析。
　　

3、3. 實驗研究:
　　 （1）制作雞胚絨毛尿囊膜(CAM)模型,以模組和空白組為陰性對照，以堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)組和麝香保心丸組為陽性對照，設(shè)五個時間點連續(xù)觀察,比較同一時間點各組藥物干預(yù)后CAM 血管生成數(shù)目，并分別比較各藥物組在不同時間點CAM 血管生成數(shù)。
　　 （2）采用溴化二甲噻唑二苯四氮唑（MTT）比色法測定各藥物組對大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖率,觀察MTT 法作用于大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞時的增殖情況，計

4、算增殖率并進(jìn)行組間比較。
　　 （3）用劃痕愈合實驗觀察內(nèi)皮細(xì)胞遷移率，倒置顯微鏡下觀察各藥物組于劃痕后0～24 小時對心氣虛血瘀證大鼠模型內(nèi)皮細(xì)胞遷移情況并計數(shù),了解益氣活血法對內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響。
　　 （4）通過檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞管腔結(jié)構(gòu)的形成，進(jìn)行管腔計數(shù)：光鏡下觀察，內(nèi)皮細(xì)胞連接呈C 形即算一個管腔，每張玻片在低倍鏡下選取3 處管腔密集的視野，在每個放大（×100）的視野計數(shù)管腔數(shù)。每組隨機(jī)獲取10 個圖像，取平

5、均值，比較各藥物組間差異，了解益氣活血法對內(nèi)皮細(xì)胞的成管影響。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分:冠心病氣虛血瘀證的文獻(xiàn)研究
　　 （1）胸痹心痛的產(chǎn)生是多因素復(fù)合作用的結(jié)果，其中陽微陰弦是冠心病的關(guān)鍵病機(jī)，氣虛血瘀是陽微陰弦的最新釋義，是冠心病發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)。
　　 （2）氣虛血瘀證是冠心病主要證型之一，其辨證標(biāo)準(zhǔn)及客觀化研究、動物模型等研究均有一定的進(jìn)展，益氣活血是CHD氣虛血瘀證主要治法，探索中醫(yī)藥

6、的促血管生成作用是一個有意義的研究方向。
　　 第二部分:冠心病氣虛血瘀證特征的臨床研究
　　 （1）冠心病氣虛血瘀證兼具心氣虛和心血瘀阻的臨床表現(xiàn),與冠心病常見危險因素密切相關(guān)，尤其與患者年齡、體重指數(shù)、甘油三脂、高密度脂蛋白膽固醇等關(guān)系密切（均P＜0.01）。
　　 （2）冠心病氣虛血瘀證和冠心病氣滯血瘀證在面、舌、甲、脈診上都有一定的證候特征，如面青、舌紫、甲瘀、脈澀等，均具有“心血瘀阻”的共性。但兩證型在

7、臨床癥征和多項微觀指標(biāo)方面均存在統(tǒng)計學(xué)意義（ p <0.01 或p <0.05）。心氣虛血瘀證患者面部主波波幅（Hb）、快速充盈系數(shù)（Hb/Tab）、脈圖的心搏系數(shù)（[t4-t1]/t）、心功系數(shù)（t1/t）及反映心臟功能的4 項指標(biāo)惻值（ Sv、Co、Si、Ci）均明顯減低，其微循環(huán)管袢短小、模糊，血管充盈不良，血色較淡。
　　 第三部分:益氣活血法促血管新生的實驗研究
　　 （1）益氣活血法促雞胚絨毛尿囊膜血管新生實

8、驗① 0 小時和24 小時，各藥物組與模組和空白組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（p >O.05)；且各藥物組組間比較亦無統(tǒng)計學(xué)意義（p >O.05)。
　　 ② 48 小時，各藥物組與模組、空白組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（均p<0.05）；各藥物組組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（p >O.05)。
　　 ③ 72 小時，各藥物組與模組、空白組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（均p<0.05）；養(yǎng)心通脈方Ⅰ組(YTI)與麝香保心丸組(SXBXW)組間比較無統(tǒng)計學(xué)意

9、義（p >O.05)； YTⅠ組與bFGF 組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（ p <0.05）；養(yǎng)心通脈方Ⅱ組(YTⅡ )與SXBXW 組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（p <0.05)； YTⅡ組與bFGF 組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（ p >O.05）； YTⅠ組與YTⅡ組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（ p <0.05）。各組促血管新生數(shù)目由大至小依次為bFGF組> YTⅡ組> YTⅠ組> SXBXW 組>模組>空白組。96 小時，各藥物組與模組、空白組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（均p

10、 <0.05）；各藥物組組間比較結(jié)果同72 小時。
　　 ④各藥物組促血管新生作用隨時間的推移而逐漸增強(qiáng)。模型組和空白組在五個時間點血管雖也逐步增加，但其增長幅度均遠(yuǎn)不及各藥物組。YTⅡ組和bFGF 組在96 時后回歸曲線仍保持上升趨勢不變，兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義（ p >O.05），而其它各組96 時后回歸曲線呈下降趨勢。
　　 （2）益氣活血法促大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖實驗各藥物組與生理鹽水組（NS 組）和空白血清組比較均有

11、統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），但NS 組與空白血清組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（ P>0.05）。各藥物組均具有促大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用。其中，YTⅡ組與YTI 組、SXBXW 組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），但bFGF 組與YTⅡ組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（ P>0.05）。YTI 組與SXBXW 組之間比較亦無統(tǒng)計學(xué)意義（ P>0.05）。各組促內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用由大至小依次為：重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子組（bFGF）>養(yǎng)通Ⅱ組（YTⅡ）>養(yǎng)

12、通I 組（YTI）>麝香保心丸組（SXBXW）>生理鹽水組（NS）>空白血清組（KX）。
　　 （3）益氣活血法促大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移實驗各藥物組與NS 組和空白血清組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），但NS 組與空白血清組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（ P>0.05）。各藥物組均具有促大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移作用。各藥物組組間比較結(jié)果同增殖實驗。各組促內(nèi)皮細(xì)胞遷移作用由大至小為：bFGF 組> YTⅡ組>YTI 組>SXBXW 組>NS組

13、>空白血清組。
　　 （4）益氣活血法促大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞成管實驗各藥物組與NS 組和空白血清組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），但NS 組與空白血清組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（ P>0.05）。各藥物組均具有促大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞成管作用。各藥物組組間比較結(jié)果同增殖實驗。各組促內(nèi)皮細(xì)胞成管作用由大至小為：bFGF 組> YTⅡ組>YTI 組>SXBXW 組>NS組>空白血清組。
　　 結(jié)論:
　　 1. 氣虛血瘀是冠心病

14、發(fā)生的關(guān)鍵病機(jī)，氣虛血瘀證是CHD 中醫(yī)證型的主要證型之一，益氣活血是冠心病氣虛血瘀證的重要治法，其治療冠心病氣虛血瘀證具有堅實的理論依據(jù)、臨床和實驗基礎(chǔ)。
　　 2. 冠心病氣虛血瘀證兼具心氣虛和心血瘀阻的表現(xiàn)，在各微觀指標(biāo)上有一定的證候特征，本實驗研究結(jié)果為CHD 氣虛血瘀證的臨床診斷及與氣滯血瘀證的鑒別提出了客觀微觀化指標(biāo)。
　　 3. 以益氣活血法立方的YTI 和YTⅡ均能促進(jìn)雞胚絨毛尿囊膜模型新生血管的生成,提