乙型肝炎病毒（HBV）X基因的真核細(xì)胞載體的構(gòu)建.pdf

1、目的:通過構(gòu)建一含有天然完整的乙型肝炎病毒X基因序列的真核細(xì)胞表達(dá)載體,為制備X抗體和HBx檢測(cè)試劑盒的研制,以及HBVX基因及其編碼蛋白(X蛋白或HBx)的生物學(xué)功能和HBx與其他宿主功能蛋白的相互作用研究提供可靠的基因材料.方法:用PCR方法從含完整乙型肝炎病毒全基因的HepG2.2.15細(xì)胞中擴(kuò)增含HindⅢ和EcoR Ⅰ酶切位點(diǎn)的X基因序列,并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA序列分析,將pUC118質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物雙酶切并純化,用連接酶將

2、兩者連接并轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞JM109,稱pUC118-HBx,再將pUC118-HBx與pcDNA3.1(+)雙酶切,將pcDNA3.1(+)和X基因片段純化并用連接酶連接,轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5 α,稱pcDNA3.1(+)-HBx,并對(duì)pUC118-HBx和pcDNA3.1(+)-HBx用限制性核酸內(nèi)切酶酶譜分析,PCR及DNA序列分析等方法進(jìn)行檢測(cè).結(jié)果:構(gòu)建的重組原核質(zhì)粒pUC118-HBx和真核細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-

3、HBx經(jīng)用限制性核酸內(nèi)切酶酶譜分析,PCR及DNA序列分析等方法證實(shí)含有完整的HBV X基因DNA序列.結(jié)論:1、獲得了HBV X基因的重組原核質(zhì)粒pUC118-HBx和真核細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-HBx,為HBx檢測(cè)試劑盒的研制,為X基因與HBx的生物學(xué)功能研究和HBx與其他宿主功能蛋白的相互作用研究提供可靠的基因材料.2、經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶酶譜分析,PCR及DNA序列分析證實(shí)重組原核質(zhì)粒pUC118-HBx和真核細(xì)胞表達(dá)