C3aR激活在尿酸或脂多糖介導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞CC類趨化因子表達(dá)中的作用.pdf

1、目的：探討人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞表面補體片段C3a受體(C3aR）的激活對于單核趨化蛋白-1(CCL2)與受激活調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(CCL5)表達(dá)產(chǎn)生的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)，以0、75、150、300、600umol/L濃度尿酸(UA）分別作用6、12、24及48小時，利用RT-PCR檢測CCL2、CCL5、C3和C3aR的mRNA水平，選擇最適的尿酸誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時間。在UA

2、或脂多糖(LPS)誘導(dǎo)下，通過小干擾RNA(siRNA)轉(zhuǎn)染下調(diào)HK-2細(xì)胞C3的表達(dá)、小分子C3aR阻斷劑阻斷C3a-C3aR作用、外源性C3a刺激促進(jìn)C3aR激活三種方式抑制或激活C3aR的信號通路，并通過Q-PCR及ELISA法檢測其對于CCL2、CCL5表達(dá)產(chǎn)生的影響。
　　結(jié)果：150umol/L UA干預(yù)HK-2細(xì)胞12h可同時上調(diào)C3與CCL2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平；在該實驗中，UA對于HK-2細(xì)胞CCL5 mRNA的誘

3、導(dǎo)作用較弱，使用RT-PCR法在各濃度及時間點下未檢測出明顯統(tǒng)計學(xué)差異，此后改用LPS對CCL5進(jìn)行誘導(dǎo)。C3siRNA轉(zhuǎn)染或C3aR阻斷能夠抑制被UA或LPS上調(diào)的CCL2及CCL5的表達(dá)。C3a單獨干預(yù)HK-2細(xì)胞時顯著上調(diào)了CCL5的表達(dá)，但對CCL2的表達(dá)幾乎無誘導(dǎo)作用。而當(dāng)C3a與UA或LPS進(jìn)行聯(lián)合干預(yù)時，其顯著增強了UA或LPS對CCL2的誘導(dǎo)作用及UA對CCL5的誘導(dǎo)作用。
　　結(jié)論：HK-2細(xì)胞表面C3aR的激活