食管癌組織中ΔNp73和p73在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)狀況及相關(guān)性研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文食管癌組織中ΔNp73和p73在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)狀況及相關(guān)性研究姓名：李月考申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：王福順單保恩20040301中文摘要UICC，】997)：I、】I期17例，III、Ⅳ期17例。標(biāo)本于術(shù)中離體半小時(shí)內(nèi)取材，立即置入液氮速凍，并保存子一80。C冰箱備用。從癌組織標(biāo)本中提取總RNA，并通過電泳和紫外線分光光度儀鑒定總RNA的完整性及純度。對總RNA定量后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增。ANp73

2、基因的引物序列為：正義引物P1：5’一CGCCTACCATGCTGTACGTC3’；反義引物P2：5’GTGCTGGACTGCTGGAAAGT3’。熱循環(huán)條件為：37“C反轉(zhuǎn)錄60分鐘；94“C5分鐘滅活逆轉(zhuǎn)錄酶；94(2變性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸40秒，35個(gè)循環(huán)后72℃延伸7分鐘。p73基因的引物序列為：正義引物P1：5’CGACGGCTGCAGAGCGAG一3’；反義引物P2：5TCGAAGGTGGAGCTGGGTT

3、G一3’。熱循環(huán)條件為：37℃反轉(zhuǎn)錄60分鐘；94℃5分鐘滅活逆轉(zhuǎn)錄酶：94℃變性30秒，59℃退火30秒，72℃延伸40秒，35個(gè)循環(huán)后72℃延伸7分鐘。13actin作為內(nèi)參照。反應(yīng)完畢離心后保存。最后對RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)觀察電泳DNA條帶，并使用凝膠成像分析軟件對結(jié)果進(jìn)行相對定黃分析。以mRNA指數(shù)(RI)作為表達(dá)水平參數(shù)，即p73RI=p73mRNA／B—actinmRNA；△Np73RI=ANp7