慢性重型乙型肝炎患者HBV前C-BCP區(qū)基因突變分析.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)感染的結(jié)局是由病毒、肝細(xì)胞和宿主免疫系統(tǒng)相互作用決定的。HBV感染重癥化導(dǎo)致的重型肝炎或肝衰竭在臨床上病情危重、發(fā)展迅速、病死率很高，是我國(guó)傳染病死亡的重要原因之一。重型乙型肝炎肝衰竭的發(fā)病機(jī)制尚未得到系統(tǒng)闡明。HBV基因突變是影響病毒生物學(xué)特性的基本因素之一，HBV突變有可能改變病毒的復(fù)制能力和致病性、改變抗原表位而影響免疫應(yīng)答反應(yīng)、產(chǎn)生抗病毒藥物耐藥性等，既有可能引起持續(xù)感染

2、，又有可能造成嚴(yán)重的肝細(xì)胞損傷。HBV基因組有4個(gè)主要開放讀碼框架(Open Reading Frames，ORF)：S基因(包括前S1、前S2和S區(qū))、C基因(包括前C和C區(qū))、P基因和X基因。此外，還包括多個(gè)與HBV復(fù)制轉(zhuǎn)錄相關(guān)的基因調(diào)控序列。國(guó)內(nèi)外已有一些文獻(xiàn)報(bào)道了HBV基因突變與慢性重型乙型肝炎(Chronic severe hepatitis B，CSHB；簡(jiǎn)稱慢重肝)的關(guān)系，其中包括對(duì)HBV前C/基本核心啟動(dòng)子(Basal

3、CorePromoter，BCP)突變的研究。研究表明前C/BCP區(qū)某些突變可以影響HBeAg的表達(dá)/分泌或增加病毒復(fù)制能力。有人認(rèn)為分泌型HBeAg與HBcAg有共同的抗原表位，可以減緩細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)對(duì)表達(dá)HBcAg的肝細(xì)胞的攻擊，因而該區(qū)突變不利于免疫耐受，但與慢性肝炎的病情加重相關(guān)。然而以往對(duì)前C/BCP基因突變研究結(jié)果并不一致，對(duì)上述觀點(diǎn)也有爭(zhēng)議，這可能與分析的樣本數(shù)較小以及方法學(xué)上的差異有關(guān)。本文旨在應(yīng)用DNA序列

4、測(cè)定法進(jìn)行多位點(diǎn)突變檢測(cè)，通過比對(duì)分析較大量慢重肝和慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B，CHB；簡(jiǎn)稱慢乙肝)患者樣本HBV在各個(gè)位點(diǎn)上的突變發(fā)生率，解析HBV前C/BCP區(qū)基因突變與慢性乙肝重癥化的關(guān)系。 目的：本研究檢測(cè)了87例慢重肝患者血清HBV前C/BCP區(qū)突變情況，并通過與196例慢乙肝樣本的對(duì)比，分析探討了HBV前C/BCP區(qū)核苷酸突變與乙肝重癥化的關(guān)系。 方法：研究對(duì)象均為成年患者，收集87

5、例慢重肝和196例慢乙肝患者血清，提取HBV DNA，采用經(jīng)我們改進(jìn)的巢式PCR技術(shù)，擴(kuò)增HBV前C/BCP區(qū)基因，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，用NBI軟件比對(duì)結(jié)果。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，重點(diǎn)檢測(cè)了G1896、A1762、G1764、T1753、G1862和G1899共6個(gè)影響HBeAg表達(dá)、分泌或HBV復(fù)制能力的位點(diǎn)突變。 結(jié)果： (1)6個(gè)位點(diǎn)突變?nèi)繛殛幮哉撸郝馗谓M有3例，占3.4％，慢乙肝組有55例，占28.1％，兩組間

6、有顯著差異(P＜0.01)。 (2)在檢測(cè)出突變的患者中，6個(gè)位點(diǎn)上慢重肝組在每個(gè)位點(diǎn)突變頻率上均較慢乙肝組高，其中5個(gè)位點(diǎn)上的突變檢出率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別為A1762(78.2％vs56.6％，P＜0.01)、G1764(88.5％vs61.2％，P＜0.01)、G1862(9.2％vs2.0％，P＜0.05)、G1896(52.9％vs34.2％，P＜0.01)，G1899(25.3％vs7.1％，P＜0.01)。

7、(3)此外，插入/缺失突變形式在慢重肝組的檢出率顯著高于慢乙肝組(10.3％vs1.0％，P＜0.01)。 (4)多聯(lián)核苷酸替換突變計(jì)算也顯示慢重肝組的檢出率顯著高于慢乙肝組：三聯(lián)或三聯(lián)以上核苷酸替換的檢出率分別為56.3％和35.2％(P＜0.01)，四聯(lián)或四聯(lián)以上核苷酸替換的檢出率分別為25.3％和8.7％(P＜0.01)。 結(jié)論：HBV前C/BCP區(qū)基因突變發(fā)生頻率的增加與慢性乙肝發(fā)生重癥化相關(guān)，慢乙肝患者在發(fā)生H