雌性大鼠染As2O3后F1代睪丸發(fā)育及vasa基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的：通過(guò)孕前三氧化二砷（As2O3）染毒8周雌性SD大鼠，受孕后，觀察子代的睪丸結(jié)構(gòu)變化及vasa的表達(dá)，探討雌性大鼠孕前As2O3染毒后對(duì)F1代雄性生殖發(fā)育的影響，以期為砷中毒患者下一代生殖健康研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：48只成年SD雌性大鼠隨機(jī)分為三組，每組16只，以灌胃方式分別給予大鼠雙蒸水為A組、As2O3溶液0.75 mg/kg/d為B組，1.5 mg/kg/d為C組，每天染砷一次，連續(xù)灌胃8周，建立慢性As2O3

2、染毒 SD雌性大鼠動(dòng)物模型，雌雄（2:1）合籠受孕。各組分別取17.5天胎鼠和出生后24h內(nèi)新生鼠進(jìn)行胚胎總數(shù)、活胎、死胎及吸收胎的計(jì)數(shù)，稱(chēng)重，鑒別雌雄；取睪丸做以下檢測(cè)：1.H-E染色觀察睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)；2.透射電鏡觀察睪丸精原細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；3.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)VASA蛋白的表達(dá)；4. qRT–PCR檢測(cè)vasa mRNA的相對(duì)表達(dá)。
　　結(jié)果：1.各組F1代數(shù)量：B與A組相比P＞0.05，無(wú)差異；C與A組、B與C組相比，均

3、P<0.05，有差異；2.各組F1代重量：17.5天胎鼠重量，兩兩比較，P<0.01有顯著差異；新生鼠重量B與A組比較P＞0.05，無(wú)差異，C與A組比較，P<0.05，有顯著性差異，B與C組比較P＞0.05，無(wú)差異；3.HE染色鏡下可見(jiàn)：17.5天胎鼠 A組睪丸生精索排列、形態(tài)規(guī)則，生精索內(nèi)前精原細(xì)胞排列緊密，體積大、細(xì)胞核大而圓，胞質(zhì)較少，B、C組睪丸生精索排列紊亂、索間結(jié)締組織增多，索內(nèi)前精原細(xì)胞排列逐漸松散、體積減小。新生鼠睪丸

4、A組生精索排列、形態(tài)規(guī)則，在同一生精索內(nèi)可見(jiàn)處于不同階段大小不等的精原細(xì)胞排列緊密，測(cè)量各組生精索直徑，兩兩比較，P<0.01，有顯著差異；測(cè)量各組睪丸精原細(xì)胞直徑，兩兩比較，P<0.01；測(cè)量各組睪丸精索間面積B與A組比較，有差異P<0.05，C與A組比較，有顯著性差異P<0.01，B組與C組比較有顯著性差異P<0.01，隨染砷劑量的增加生精索直徑、精原細(xì)胞直徑逐漸減小，生精索間面積逐漸增大；4.電鏡可見(jiàn)：17.5天胎鼠A組睪丸組織前

5、精原細(xì)胞呈橢圓形，細(xì)胞膜清晰，細(xì)胞體積大，核大呈圓形、橢圓形胞質(zhì)較少，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器僅見(jiàn)線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，線粒體呈圓形或長(zhǎng)橢圓形，與胞質(zhì)間的邊界清晰，線粒體嵴完整平行排列，基質(zhì)中見(jiàn)線粒體顆粒分布，電子密度比細(xì)胞質(zhì)高；B組前精原細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn)線粒體稍腫大，少數(shù)線粒體電子密度減低；C組觀察前精原細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)大量線粒體腫脹，體積增大，基質(zhì)中見(jiàn)線粒體顆粒分布減少，電子密度降低，呈空泡狀壞死，少數(shù)線粒體破裂，線粒體嵴斷裂，與胞質(zhì)間的分界模糊不清，粗面

6、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯減少。新生鼠 A組睪丸組織精原細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大量線粒體，圓形或橢圓形，線粒體顆粒分布均勻，電子密度比細(xì)胞質(zhì)高，與胞質(zhì)間的界清晰，線粒體嵴完整平行排列，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)清晰可見(jiàn)，細(xì)胞間可見(jiàn)明顯的細(xì)胞連接；B組精原細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)線粒減少并松散，呈不規(guī)則形，少量線粒體體積增大，電子密度減低，個(gè)別線粒體嵴斷裂，呈空泡狀； C組精原細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)大量線粒體腫脹，體積明顯增大，呈不規(guī)則形，電子密度降低，線粒體嵴斷裂并減少，呈空泡狀壞死，個(gè)別線粒體破裂，

7、與胞質(zhì)間的分界模糊不清，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)少見(jiàn)；5.免疫組織化學(xué)檢測(cè)：17.5天胎鼠睪丸內(nèi)各組均未見(jiàn)VASA蛋白表達(dá)；新生鼠各組睪丸生精索內(nèi)精原細(xì)胞可見(jiàn) VASA蛋白表達(dá)，隨染砷劑量增加而表達(dá)逐漸下調(diào)，作組間兩兩比較，均 P＜0.01，有顯著差異；6. qRT–PCR技術(shù)檢測(cè)：17.5天胎鼠睪丸前精原細(xì)胞各組均有vasa mRNA表達(dá)，作組間兩兩比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；新生鼠睪丸精原細(xì)胞各組均有vasa mRNA表達(dá)，作組間兩兩比較，P＜0.01