聚陽離子材料在腫瘤基因治療及協(xié)同藥物逆轉多藥耐藥的研究.pdf

1、本論文對聚陽離子載體在基因運輸和解決多藥耐藥問題方面的應用作了研究，主要分為以下三方面:
　　1)成功合成了一種類PEI聚天冬酰胺氨基衍生物PEE，通過氫譜核磁共振對合成的PEE進行結構的確認，形態(tài)學表征證實了PEE能與質粒DNA形成均勻的球狀復合物，易于細胞攝取。通過體外細胞實驗研究了細胞攝取過程、細胞毒性和基因表達效率等，說明PEE在體外具有類PEI的細胞毒性和基因表達能力。通過小鼠和異體荷B16BL6瘤的裸鼠研究了PEE的體

2、內毒性和轉染效率，血象和H/E染色切片表明PEE對心臟、肝臟、腎臟這些主要器官均無毒性，活體熒光成像和冰凍切片實驗說明其體內的轉染效率與PEI類似。從體內外水平證明了PEE是一種功能上與PEI類似的低體內毒性的聚天冬酰胺氨基衍生物基因載體。
　　2)成功合成了一種能攜帶藥物和基因自組裝形成膠束的聚乙烯亞胺-環(huán)糊精-膽固醇兩親性聚陽離子高分子PCC。對不同膽固醇接枝率的PCC進行了理化性質、細胞毒性、載基因和載藥能力的研究，發(fā)現(xiàn)外層

3、陽離子與基因的相互作用和壓縮會導致疏水內核中的藥物釋放減緩。將靶向MDR1的siRNA和DOX聯(lián)用，利用siRNA把P-gp沉默，然后緩釋的DOX被耐藥細胞泵出量減少，細胞內濃度增加，使DOX在細胞內發(fā)揮藥效，最終達到逆轉耐藥的目的。DOX細胞內富集實驗證明了在siRNA的存在下，DOX在細胞內濃度增加并能長時間在細胞內停留。Western Blotting實驗和RT-PCR實驗證明了PCC/DOX/siRNA體系能有效沉默P-gp，引

4、起細胞凋亡。體內實驗也證明PCC/DOX/siRNA體系具有較好的逆轉耐藥能力，能抑制腫瘤生長。
　　3)在藥物耐藥機制的工作中，初步研究了A2780/T細胞暴露于不同體系對細胞基因表達的影響，找到了各個體系的差異表達基因。通過GeneMANIA和STRING數(shù)據(jù)庫的分析，發(fā)現(xiàn)A2780/T細胞長時間暴露于低劑量PTX會對細胞的周期、凋亡、DNA損傷、氨基代謝等各方面有影響。PCC/PTX和PCC/PTX/siMDR1暴露的細胞差