還腦益聰方對(duì)老年癡呆大鼠炎癥因子和神經(jīng)元Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白的影響.pdf

1、老年性癡呆(Alzheimer’s disease,AD)是1907年Alois Alzheimer首先發(fā)現(xiàn)并命名的一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。臨床以大腦皮質(zhì)獲得性高級(jí)功能受損,即癡呆為主要特征,包括不同程度的記憶力、感覺能力、判斷力、思維能力、運(yùn)動(dòng)能力等受損,以及情感反應(yīng)障礙和性格改變。國(guó)外流行病學(xué)調(diào)查表明,65歲以上人群癡呆患病率為5％～7％,其中50％為AD。我國(guó)是世界上社會(huì)老齡化速度最快的國(guó)家之一,目前AD患者已有500萬人,隨著老

2、齡人口的逐年增加,AD必將成為一個(gè)嚴(yán)重的社會(huì)問題和經(jīng)濟(jì)問題。由于目前AD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了,西醫(yī)學(xué)缺乏行之有效的治療方法。目前國(guó)內(nèi)外治療AD的西藥大多數(shù)處于臨床實(shí)驗(yàn)中,且長(zhǎng)期服用這類西藥易引起嚴(yán)重的毒副反應(yīng),損害肝腎等器官。中藥復(fù)方因有多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)、多向調(diào)節(jié)的作用優(yōu)勢(shì),并且具有預(yù)防和治療的雙重作用,因此,從中醫(yī)藥方面探尋AD的有效治療途徑已成為國(guó)內(nèi)研究的主要趨勢(shì)。本文即通過實(shí)驗(yàn)觀察中藥還腦益聰方改善老年癡呆大鼠認(rèn)知功能的效

3、果,并探討其作用途徑及機(jī)理。
　　 目的:
　　 觀察還腦益聰方對(duì)自然衰老的AD大鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力、炎癥因子IL-6及TNF-α、大鼠海馬病理組織形態(tài)學(xué)以及NF-kB、ERAβ表達(dá)的影響,闡釋還腦益聰方的作用機(jī)理和途徑,為臨床治療AD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、老齡大鼠50只,通過Morris水迷宮篩選出學(xué)習(xí)記憶能力減退的老年大鼠40只,并按隨機(jī)表數(shù)字隨機(jī)分為4組,每組10只動(dòng)物,即老年模型

4、(癡呆)組,鹽酸多奈哌齊組,中藥(還腦益聰方)大劑量組,和中藥(還腦益聰方)小劑量組,同時(shí)將學(xué)習(xí)記憶正常的老年大鼠和青年大鼠各10只設(shè)為老年對(duì)照組、青年對(duì)照組。
　　 2、老年模型組,不給藥,灌胃等體積的自來水；鹽酸多奈哌齊組,每日按0.45mg/Kg灌胃給予事先配置好的鹽酸多奈哌齊混懸液；中藥大劑量組每日灌胃給予還腦益聰方藥液,13.68g生藥/Kg；中藥小劑量組每日灌胃給予還腦益聰方藥液,6.84g生藥/Kg；同時(shí)將老年對(duì)照

5、組大鼠和青年對(duì)照組大鼠每日灌胃給予等體積自來水。各藥物組按照劑量連續(xù)灌胃給藥8周,1次/d。
　　 3、給藥8周后,再進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試,測(cè)定各組動(dòng)物在水迷宮中尋找平臺(tái)的時(shí)間、路線以及撤除平臺(tái)后大鼠進(jìn)出原平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)。行為學(xué)結(jié)束后腹主動(dòng)脈取血,測(cè)定血清學(xué)指標(biāo)。動(dòng)物斷頭處死,取全腦分成左、右半腦,分離左側(cè)海馬,勻漿后測(cè)定其IL-6,TNF-α含量,右側(cè)半腦行常規(guī)石蠟包埋、切片,HE染色后光鏡觀察海馬形態(tài)學(xué)變化,免疫組化法

6、分析海馬NF-kB、ERAβ的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、與青年對(duì)照組大鼠比較,老年模型組大鼠的尋臺(tái)路線長(zhǎng)度、尋臺(tái)時(shí)間及尋臺(tái)次數(shù)均有顯著延長(zhǎng)或減少(P<0.05)。與老年對(duì)照組大鼠比較,老年模型組大鼠的尋臺(tái)路線長(zhǎng)度和尋臺(tái)時(shí)間有顯著延長(zhǎng)(P<0.05)。說明老年模型組大鼠確實(shí)存在認(rèn)知功能減退。
　　 與老年模型組大鼠比較,鹽酸多奈哌齊組、中藥大、小劑量組大鼠在尋臺(tái)路線長(zhǎng)度、尋臺(tái)時(shí)間及尋臺(tái)次數(shù)有顯著減少或提高(P

7、<0.05),表明還腦益聰方有明顯改善AD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的作用。
　　 2、老齡大鼠腦組織病理形態(tài)結(jié)果顯示,神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量減少,海馬區(qū)有片狀軟化灶,細(xì)胞較稀疏,排列較散亂。尤其老年癡呆大鼠更為明顯,其錐體細(xì)胞層不完整,可見少量細(xì)胞胞體縮小,胞漿淡紅色,胞核固縮深染。青年組大鼠海馬的神經(jīng)細(xì)胞密集,排列整齊,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚,細(xì)胞核及胞質(zhì)清晰,各層細(xì)胞清晰,排列有序。
　　 中藥大、小劑量組和鹽酸多奈哌齊組經(jīng)治療后,大鼠海馬的

8、神經(jīng)元細(xì)胞排列還是較為散亂,但細(xì)胞數(shù)量有所增加,細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本清析,細(xì)胞核及胞質(zhì)可見。表明還腦益聰方可以改善AD大鼠的海馬組織病理。
　　 3、與青年對(duì)照組大鼠比較,老年模型組大鼠的IL-6及TNF-α水平均顯著增加(P<0.05)。老年模型組與老年對(duì)照組比較,IL-6水平顯著增加(P<0.05),TNF-α水平有所增加,但無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明老年模型組大鼠腦內(nèi)存在著炎癥反應(yīng)。
　　 與老年模型組比較,鹽酸多奈哌齊和還腦

9、益聰方大、小劑量組可以顯著降低AD大鼠的IL-6、TNF—α水平(P<0.05,P<0.01),表明還腦益聰方對(duì)AD大鼠的炎癥因子水平有抑制作用。
　　 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與青年對(duì)照組大鼠比較,老年模型組大鼠的ERAB陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多(P<0.05)。老年模型組大鼠ERAβ陽性細(xì)胞數(shù)高于老年對(duì)照組,但統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無顯著差異。老年AD大鼠經(jīng)鹽酸多奈哌齊和中藥大、小劑量治療后,ERAβ陽性細(xì)胞數(shù)顯著降低(P<0.01,P<0.05)

10、,表明還腦益聰方可以抑制老年AD大鼠海馬ERAβ的表達(dá)。
　　 與青年對(duì)照組大鼠比較,老年模型組大鼠的NF-kB陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多(P<0.05)。與老年對(duì)照組比較,NF-kB陽性細(xì)胞數(shù)增多,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與老年模型組大鼠比較中藥大、小劑量組的NF-kB陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.01,P<0.05),表明還腦益聰方可以抑制老年AD大鼠海馬NF-kB的表達(dá),從而抑制AB在大鼠腦內(nèi)的異常沉積,進(jìn)而改善AD癥狀。
　　 結(jié)