一個(gè)神經(jīng)系統(tǒng)高表達(dá)蛋白BEX1與其相互作用蛋白hSNF5的功能研究.pdf

1、我們首先克隆得到小鼠的Bex1基因,檢測小鼠不同發(fā)育時(shí)期胚胎中Bex1 mRNA的表達(dá)變化情況,發(fā)現(xiàn)它在成年鼠腦中的表達(dá)量大大低于小鼠胚胎,說明它確實(shí)與小鼠腦的發(fā)育相關(guān).用小鼠胚胎進(jìn)行的整體原位雜交顯示,Bex1在神經(jīng)系統(tǒng)高表達(dá),尤其在前腦和側(cè)腦.用成年小鼠腦切片進(jìn)行的原位雜交發(fā)現(xiàn),Bex1在神經(jīng)元中特異性表達(dá),且在海馬中的表達(dá)量高于其它部位.因信息學(xué)分析未發(fā)現(xiàn)已知的功能結(jié)構(gòu)域,為尋找人BEX1基因的功能線索,我們以BEX1全長為"誘餌

2、"蛋白,通過酵母雙雜交技術(shù)篩選人胎腦cDNA文庫,尋找與之相互作用的蛋白.結(jié)果發(fā)現(xiàn),人染色質(zhì)重塑復(fù)合體SWI/SNF的核心成員hSNF5能與BEX1相互作用.為了進(jìn)一步驗(yàn)證這種相互作用,我們進(jìn)行了GST—Pull down試驗(yàn).在大腸桿菌中表達(dá)了GST-BEX1融合蛋白,用Sepharose 4B進(jìn)行親和層析純化.同時(shí)將hSNF5構(gòu)建入真核表達(dá)載體pcDNA4/myc,轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后,獲得真核表達(dá)的帶myc標(biāo)簽的hSNF5蛋白.GS

3、T-Pull down結(jié)果證實(shí),BEX1和hSNF5能在體外結(jié)合.此外,免疫熒光共定位試驗(yàn)顯示,兩者在細(xì)胞中的分析有重疊區(qū)域,均在細(xì)胞核中有分布.以上三種實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本證實(shí)兩者之間確實(shí)存在相互作用.為了研究BEX1可能具有的功能,我們進(jìn)行了細(xì)胞周期試驗(yàn).觀察到SNF5單獨(dú)轉(zhuǎn)染G401細(xì)胞時(shí)能輕微促進(jìn)細(xì)胞的增殖,BEX1與hSNF5共同轉(zhuǎn)染后,促進(jìn)效果更為顯著.由于BEX1本身并未發(fā)現(xiàn)能與DNA直接結(jié)合,而hSNF5所在的染色質(zhì)重塑合體單獨(dú)