人白細胞介素10基因給藥對NOD鼠糖尿病的預防作用.pdf

1、(一)重組人白細胞介素10基因的克隆及其在CHO細胞中的表達.目的:克隆編碼人白細胞介素10(human interleukin 10, hIL10)基因的全長cDNA,在CHO細胞中獲得高表達.方法:應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù),從活化的正常人外周血單個核細胞中擴增出hIL10cDNA,將測序正確的hIL10cDNA克隆到真核表達載體pcDNA3構(gòu)建重組表達載體.采用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染CHO細胞,用ELISA法檢測hIL10

2、蛋白的表達量,用MTT法檢測hIL10蛋白的活性.結(jié)果:RT-PCR產(chǎn)物插入Teasy載體,經(jīng)序列測定證實hIL10基因全序列克隆成功.在CHO細胞培養(yǎng)上清中有hIL10的表達,該產(chǎn)物能抑制淋巴細胞轉(zhuǎn)化.結(jié)論:hIL10基因的獲得及在真核細胞中的表達,為進一步研究IL10基因治療在自身免疫、移植免疫及炎癥性疾病中的作用提供了基礎(chǔ).(二)人白細胞介素10基因給藥對NOD鼠糖尿病的預防作用.目的:探討hIL10基因治療對非肥胖糖尿病(non

3、obese diabetes, NOD)鼠1型糖尿病發(fā)病率、胰島炎的影響.方法:4周齡雌性NOD小鼠尾靜脈快速注射hIL10表達質(zhì)粒,對照組注射等量無質(zhì)粒Ringer's液.ELISA檢測小鼠血清中hIL10的表達,10周齡后每周測定血糖,25周齡時觀察1型糖尿病的發(fā)病率,取未發(fā)病的NOD鼠的胰腺組織行HE染色觀察胰島炎程度.結(jié)果:處理組hIL10蛋白表達始于注射后8小時,持續(xù)14天左右.處理組糖尿病發(fā)病率為25.00﹪,明顯低于對照組