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文檔簡(jiǎn)介
1、[目的]:
1.觀察DSS誘導(dǎo)的急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中miR-21的表達(dá)情況、JNK/AP-1通路的激活情況及黃芩湯的干預(yù)作用。
2.研究潰瘍性結(jié)腸炎中JNK/AP-1信號(hào)通路對(duì)miR-21表達(dá)的作用。
3.從JNK/AP-1信號(hào)通路角度探討黃芩湯下調(diào)miR-21表達(dá)的機(jī)制。
[方法]:
1.急性潰瘍性結(jié)腸炎(UC)小鼠模型的建立及給藥
56只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為
2、7組,每組8只:正常組、模型組、DMSO組、黃芩湯組、美沙拉秦組、SP600125組(SP組)、SP600125+黃芩湯組(SP+黃芩湯組)。除正常組外,其余各組小鼠通過(guò)自由飲用2.5%葡聚糖硫酸鈉(Dextran SulfateSodium,DSS)水溶液6天建立急性潰瘍性結(jié)腸炎模型。黃芩湯組、美沙拉秦組、SP+黃芩湯組分別于造模第四天灌胃給予黃芩湯(10g/kg)、美沙拉秦(0.6g/kg)、黃芩湯(10g/kg),一天兩次,直至第
3、10天;DMSO組、SP組和SP+黃芩湯組分別于造模前2小時(shí)腹腔注射DMSO(SP600125溶媒,10%)、SP600125(JNK通路抑制劑,20mg/kg)、SP600125(20mg/kg),每天一次,直至第10天。于第11天處死所有小鼠,取小鼠結(jié)腸組織。
2.檢測(cè)方法及指標(biāo)
觀察小鼠一般情況,進(jìn)行疾病活動(dòng)度評(píng)分;取材后測(cè)量各組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度,對(duì)結(jié)腸組織HE染色后進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分;采用Western Blot
4、法檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織p-JNK、p-c-Jun(Ser73)、p-c-Jun(Ser63)的表達(dá)情況;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)小鼠結(jié)腸miR-21、JNK1、JNK2、c-Jun mRNA的表達(dá)情況;ChIP實(shí)驗(yàn)分析c-Jun蛋白與miR-21啟動(dòng)子AP-1位點(diǎn)的結(jié)合能力。
[結(jié)果]:
1.與正常組相比,模型組小鼠一般情況較差,DAI評(píng)分升高,結(jié)腸縮短,病理學(xué)評(píng)分升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。黃芩湯組、美沙拉秦組、SP
5、組和SP+黃芩湯組的一般情況、小鼠DAI評(píng)分、結(jié)腸長(zhǎng)度、病理學(xué)評(píng)分均好于模型組(P<0.05)。
2.Western Blot結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組p-JNK、p-c-Jun(Ser73)、p-c-Jun(Ser63)蛋白表達(dá)升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃芩湯組、美沙拉秦組、SP組和SP+黃芩湯組的p-JNK、p-c-Jun(Ser73)蛋白表達(dá)較模型組降低,除美沙拉秦組p-c-Jun(Ser73)外均有統(tǒng)計(jì)學(xué)
6、意義(P<0.01);而黃芩湯組、美沙拉秦組、SP組和SP+黃芩湯組的p-c-Jun(Ser63)蛋白表達(dá)較模型組降低,其中SP組、SP+黃芩湯組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組miR-21的表達(dá)升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),給予黃芩湯、美沙拉秦、SP和SP+黃芩湯干預(yù)后miR-21表達(dá)降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
4.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示:與正常組相比
7、,模型組JNK1、JNK2的表達(dá)降低,c-Jun的表達(dá)升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組相比,黃芩湯組、美沙拉秦組JNK1、JNK2表達(dá)增加,c-Jun的表達(dá)減少;SP組JNK1、JNK2和c-Jun的表達(dá)降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); SP+黃芩湯組JNK1、c-Jun表達(dá)升高,JNK2表達(dá)降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
5.ChIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)錄因子c-Jun不與miR-21啟動(dòng)子區(qū)域AP-1位點(diǎn)
8、結(jié)合。
[結(jié)論]:
1.黃芩湯可緩解DSS誘導(dǎo)的急性UC癥狀。
2.黃芩湯緩解UC癥狀可能與下調(diào)結(jié)腸組織miR-21表達(dá)及抑制JNK/AP-1信號(hào)通路激活有關(guān)。
3.UC中JNK信號(hào)通路不能直接通過(guò)下游轉(zhuǎn)錄因子c-Jun調(diào)節(jié)miR-21的表達(dá),可能通過(guò)c-Jun家族的其他轉(zhuǎn)錄因子與c-Fos家族的轉(zhuǎn)錄因子形成異源二聚體,作用于miR-21啟動(dòng)子區(qū)域AP-1結(jié)合位點(diǎn)上調(diào)節(jié)miR-21的表達(dá),具體調(diào)節(jié)
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