妊娠早期母體來臨床甲減影響后代海馬IGF-1通路相關(guān)蛋白的表達(dá).pdf

1、前言
　　甲狀腺激素對(duì)于調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育起著重要的作用[1]，如果母體在胎兒甲狀腺功能尚未完全建立起來時(shí)分泌不足，會(huì)不同程度的影響后代神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育。已有很多關(guān)于母體妊娠期臨床甲減影響后代智力發(fā)育的報(bào)道，但妊娠期亞臨床甲減對(duì)后代腦發(fā)育影響的報(bào)道相對(duì)較少。本課題組以往的研究已經(jīng)成功建立了亞臨床甲減的動(dòng)物模型，用以探討妊娠期亞臨床甲減影響后代腦發(fā)育的機(jī)制，但是其詳盡機(jī)制還不清楚。IGF-1介導(dǎo)的PI3K-Akt通路對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)的

2、發(fā)育有重要生物學(xué)作用，同時(shí)也與神經(jīng)興奮突觸后電位LTP密切相關(guān)。因此本研究采用亞臨床甲減的動(dòng)物模型，觀察妊娠期亞臨床甲減對(duì)后代海馬組織中IGF-1、IGF-1R和p-Akt水平的影響。
　　方法
　　60只SPF級(jí)雌性Wistar大鼠隨機(jī)分成3組（每組n=20）。①正常對(duì)照組:行假甲狀腺切除術(shù)，術(shù)后30天每日開始皮下注射等量生理鹽水，作為正常對(duì)照組(CON);②臨床甲減組:手術(shù)切除甲狀腺，術(shù)后30天眶后靜脈叢取血驗(yàn)TSH和T

3、T4，當(dāng)TSH高于正常組、TT4＜1.0μg/dL(檢測(cè)范圍最小值)時(shí)，臨床甲減大鼠(CH)模型建立成功。③亞臨床甲減組:臨床甲減大鼠(CH)模型建立成功的基礎(chǔ)上，開始每日皮下注射左甲狀腺素(L-T4)，以1.0μg/(100g·d)濃度持續(xù)注射，當(dāng)血清TSH高于正常、但TT4水平在正常范圍時(shí)，提示亞臨床甲減大鼠(SCH)建模成功。各組模型建立成功后，雌鼠與正常的雄鼠合籠交配，雌鼠鏡下陰道涂片發(fā)現(xiàn)精子確定為妊娠0天，記為E0。L-T4及

4、生理鹽水持續(xù)皮下注射至仔鼠生后20天，將分娩當(dāng)日定為P0天。母鼠于E0及P1時(shí)眶后靜脈叢取血，測(cè)定血清TSH、TT4，確定模型在整個(gè)孕期均是成功的。各組仔鼠分別在出生后第3天(P3)以及第7天(P7)冰上斷頭，取海馬組織，以RT-PCR方法檢測(cè)IGF-1mRNA的表達(dá)，以ELISA方法檢測(cè)IGF-1、IGF-1R蛋白水平的表達(dá)，以Western-blot方法檢測(cè)Akt和p-Akt蛋白水平的表達(dá)。仔鼠出生后第40天(P40)行Morris

5、水迷宮行為學(xué)檢測(cè)及海馬興奮性突觸后電位LTP檢測(cè)。應(yīng)用SPSS16.0軟件對(duì)各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理。
　　結(jié)果
　　一、亞臨床甲減孕鼠模型制備情況
　　在妊娠0天(E0)和仔鼠出生后1天(P1)，亞臨床甲減組(SCH)母鼠血清TSH水平明顯高于同期正常對(duì)照組(p=0.000)，而血清TT4與正常對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;提示亞臨床甲減孕鼠模型制備成功，且在孕期一直處于亞臨床甲減狀態(tài)。
　　二、母體亞臨床甲減導(dǎo)致后代

6、海馬IGF-1介導(dǎo)的通路相關(guān)蛋白水平表達(dá)降低
　　P3時(shí)亞臨床甲減組仔鼠海馬的IGF-1、IGF-1R和p-Akt蛋白的表達(dá)均低于正常對(duì)照組(P＜0.05)，而顯著高于臨床甲減組(P＜0.05);P7時(shí)亞臨床甲減組仔鼠IGF-1、IGF-1R及p-Akt的表達(dá)仍低于正常對(duì)照組仔鼠(P＜0.05)，而IGF-1R和p-Akt的表達(dá)雖高于臨床甲減組仔鼠，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　三、母體亞臨床甲減的后代空間學(xué)習(xí)和記憶

7、能力受損
　　Morris水迷宮行為測(cè)定結(jié)果:定位航行試驗(yàn)中，隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，各組的逃避潛伏期總的趨勢(shì)是不斷縮短，第5天訓(xùn)練結(jié)束撤掉平臺(tái)后，對(duì)照組逃避潛伏期為（15.06±6.48）s，亞臨床甲減組為（27.88±7.98）s，臨床甲減組為(49.21±9.87)s，三組間兩兩比較，逃避潛伏期均有顯著性差異(p＜0.05)。臨床甲減組始終長(zhǎng)于對(duì)照組。亞臨床甲減組潛伏期在第1、2天與正常對(duì)照組無明顯差異(p＞0.05)，第3、4

8、天逃避潛伏期長(zhǎng)于正常對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.034;p=0.047)。最后一天撤掉平臺(tái)后，亞臨床甲減組穿越平臺(tái)象限次數(shù)為（10.8±3.51）次，正常對(duì)照組穿越平臺(tái)次數(shù)為（13.5±4.08）次，臨床甲減組穿越平臺(tái)象限次數(shù)為（8.3±4.28）次，三組間兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。
　　四、母體亞臨床甲減導(dǎo)致后代的興奮性突觸后電位LTP減弱
　　海馬經(jīng)強(qiáng)直刺激后各組興奮性突觸后電位的斜率均增加。亞臨床甲減組