溴硝醇的致突變致畸及長期毒性研究.pdf

1、目的:觀察溴硝醇單次給予和反復(fù)給予SD大鼠90天后動(dòng)物的毒性反應(yīng)、毒性靶器官和可能的延遲毒性,觀察溴硝醇的致突變致畸作用,對(duì)殺菌劑溴硝醇的暴露危害進(jìn)行評(píng)估。
　　方法:90天經(jīng)口染毒試驗(yàn)選擇100只體重在120-150g的SD大鼠,隨機(jī)分為4組,每組20只(雌雄各半),對(duì)照和高劑量組額外再分別添加10只(雌雄各半)動(dòng)物作為恢復(fù)期和可能的中期檢查用。每天給藥1次,連續(xù)給藥90天。劑量分別為每天0、20、40、及80mg/kg。試驗(yàn)期

2、間觀察指標(biāo)包括死亡率,臨床表現(xiàn),體重,攝食量評(píng)價(jià),染毒結(jié)束后每組試驗(yàn)存活大鼠被安樂死,采集的臟器用于組織病理學(xué)檢查,采集血液和膀胱尿液進(jìn)行血常規(guī)、凝血功能、血液生化、尿常規(guī)等指標(biāo)檢測,所有存活的動(dòng)物進(jìn)行解剖,對(duì)照組和高劑量組采集的臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。14天恢復(fù)期結(jié)束后,恢復(fù)組存活的大鼠被安樂死并解剖,進(jìn)行各生理指標(biāo)檢測。細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),選用CHL細(xì)胞,設(shè)暴露濃度為30、10、5、2.5mg/L(-S9)和50、40、20、10、

3、3mg/L(+S9)。正向基因突變?cè)囼?yàn),選用CHO細(xì)胞,設(shè)暴露濃度為20、10、5和2.5mg/L。Ames試驗(yàn)選用TA97,TA98,TA100,TA102和TA1535菌株,暴露濃度為50、25、12.5、6.25和3.125μg/皿(+S9),30、15、7.5、3.75和1.875μg/皿(-S9)。小鼠骨髓微核試驗(yàn),選擇60只小鼠隨機(jī)分成六組,每組10只,雌雄各半,雄性小鼠染毒劑量為20、40、80mg/kg;雌性小鼠染毒劑量

4、為25、50、100mg/kg。大鼠致畸試驗(yàn),共100只已交配雌鼠隨機(jī)分成5組,每組20只。以純化水為溶媒配制溴硝醇溶液。對(duì)照組經(jīng)口灌胃給予溶媒,染毒組經(jīng)口灌胃給予1.75、17.5、35和70mg/kg的溴硝醇溶液。染毒于妊娠6-17天進(jìn)行,每天1次。對(duì)動(dòng)物每天進(jìn)行存活率觀察和臨床癥狀觀察,測定妊娠0、3、7、10、13、16和20天體重,測定妊娠0-3、3-7、7-10、10-13、13-16及16-20天的攝食量。所有主實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于

5、妊娠21天進(jìn)行解剖和大體檢查。檢查卵巢和子宮,確定窩參數(shù)。所有存活胎仔進(jìn)行稱重及外觀檢查,測定冠臀長及性別。每窩大約1/2活胚胎放入改良后的Davidson’s固定液中進(jìn)行固定,用于內(nèi)臟檢查。剩余活胎仔用茜素紅溶液染色,用于骨骼檢查。
　　結(jié)果:在90天經(jīng)口染毒實(shí)驗(yàn)過程中,高劑量組有8只動(dòng)物死于毒性反應(yīng),毒性反應(yīng)包括行動(dòng)減緩,腹脹,體重減少(雄性動(dòng)物),攝食量減少(雄性高劑量動(dòng)物),白細(xì)胞增高(雄性高劑量動(dòng)物),血糖偏高(中劑量和

6、高劑量雄性動(dòng)物),呼吸急促,眼瞼下垂等。組織病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)靶器官,但是中期死亡的動(dòng)物大體解剖顯示高劑量溴硝醇溶液有嚴(yán)重的胃腸道刺激作用。CHL細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),各劑量組溴硝醇誘發(fā)的染色體畸變率均低于4.5％,與陰性對(duì)照組比較p>0.05,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正向基因突變?cè)囼?yàn),各劑量組溴硝醇對(duì)CHO細(xì)胞突變頻率與陰性對(duì)照比較P>0.05,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ames試驗(yàn),各劑量組溴硝醇的回變菌落數(shù)均小于陰性對(duì)照組的自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍,亦

7、無劑量反應(yīng)關(guān)系。小鼠骨髓微核試驗(yàn),溴硝醇三個(gè)劑量組微核出現(xiàn)率和對(duì)照組比較P>0.05,未引起微核出現(xiàn)率增加。致畸試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)過程中高劑量和中劑量組動(dòng)物觀察到了受試物相關(guān)的毒性反應(yīng),包括行動(dòng)減緩,呼吸困難,眼瞼下垂等,高劑量組觀察到的有毒性反應(yīng)癥狀要比中劑量多,同時(shí)高劑量組較對(duì)照組比,攝食量有所降低15％,體重、大體解剖檢查、窩仔參數(shù)、胎仔性別、胎仔體長、胎仔體重、胎仔外觀、內(nèi)臟變化未觀察到明顯異常。高劑量組骨化不完全較對(duì)照組比有明顯的高發(fā)