柿葉黃酮類化合物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗炎、抗氧化腦保護(hù)作用.pdf

1、背景：隨著人口老齡化進(jìn)程的日益加劇，衰老及腦老化問(wèn)題越來(lái)越引起人們的重視。衰老及腦老化是一種正常的生理現(xiàn)象，倘若腦老化進(jìn)展過(guò)快，便可能形成病理性的神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變，如阿爾茨海默病、帕金森病等，造成重大的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]。神經(jīng)變性疾病因其不可逆性，目前尚缺乏有效緩解疾病進(jìn)展的藥物，因此探討腦老化機(jī)理及研發(fā)有效延緩衰老、保護(hù)腦損傷的藥物，對(duì)防治神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病、提高老年人生活質(zhì)量有重要意義。D-半乳糖(D-galactose，D-g

2、al)所致亞急性衰老模型是目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用較為廣泛的衰老模型，該模型具有造模周期短、結(jié)果較為穩(wěn)定、節(jié)省時(shí)間及資金等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于老化機(jī)制、抗衰老藥物的藥效學(xué)研究[2，3]。該模型是通過(guò)給予小鼠皮下連續(xù)注射大劑量D-半乳糖，造成機(jī)體糖代謝紊亂而建立的。黃酮類化合物廣泛存在于蔬菜、水果、茶葉等多種天然植物中。研究表明，其具有清除自由基、抗炎、抗過(guò)敏、抗病毒、抑制增殖和抗致癌活性等多種生物學(xué)活性[4]。近年來(lái)，黃酮類化合物潛在的調(diào)節(jié)神經(jīng)元功能

3、，預(yù)防年齡相關(guān)的神經(jīng)變性疾病的作用越來(lái)越引起重視。黃酮類物質(zhì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的作用包括保護(hù)神經(jīng)元免于神經(jīng)毒素?fù)p傷、抑制神經(jīng)炎性反應(yīng)、減輕氧化應(yīng)激損傷、調(diào)節(jié)多種細(xì)胞信號(hào)通路、促進(jìn)記憶、學(xué)習(xí)和認(rèn)知功能等多方面[5，6]。柿葉提取物已被應(yīng)用于臨床防治多種心腦血管疾病，黃酮類物質(zhì)為其主要有效成分，然而其延緩腦衰老的作用及機(jī)制尚不十分明確。本實(shí)驗(yàn)采用國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的D-半乳糖所致亞急性衰老擬癡呆模型，探討柿葉中黃酮類化合物延緩腦老化作用及機(jī)制。
　

4、　目的：采用D-半乳糖建立亞急性衰老小鼠模型，通過(guò)Morris水迷宮試驗(yàn)、腦內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)試劑盒、AGEs/RAGE/NF-κβ炎癥通路相關(guān)指標(biāo)采用Westernblot、免疫組織化學(xué)及ELISA檢測(cè)，探討柿葉中黃酮類提取物對(duì)衰老小鼠行為學(xué)、腦內(nèi)氧化應(yīng)激及炎癥水平的影響。
　　方法：40只十二周齡雄性昆明小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組)、模型組(D-gal組)、柿葉黃酮低劑量治療組（F1組）、柿葉黃酮高劑量治療組（F2組）。

5、D-gal組及柿葉黃酮治療組于頸背部皮下注射D-半乳糖100 mg/(kg·d)，連續(xù)用藥60天建立衰老模型，F(xiàn)1組和F2組分別以40、80 mg/(kg·d)的柿葉黃酮提取物灌胃干預(yù)。對(duì)照組與模型組以同樣方法給予等體積生理鹽水。應(yīng)用Morris水迷宮試驗(yàn)測(cè)試各組小鼠逃避潛伏期(escape latency, EL)及穿越平臺(tái)次數(shù);試劑盒測(cè)定小鼠腦組織超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶

6、(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性及丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腦組織炎癥因子腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α已）、白介素-1β(interleukin-lbeta，IL-1β)的表達(dá);蛋白印跡技術(shù)測(cè)定晚期糖基

7、化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)及其受體(receptor foradvanced glycation end products，RAGE)、核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear transcriptionfactor-κB，NF-κB)的含量。
　　結(jié)果：⑴與NC組相比，D-gal組逃避潛伏期延長(zhǎng)(P＜0.01)、穿越平臺(tái)次數(shù)減少(P＜0.01)， F1組和F2組較D-gal組EL明顯

8、降低（P＜0.05，P＜0.01）、穿越平臺(tái)次數(shù)顯著增加(P＜0.01，P＜0.01)。⑵與NC相比，D-gal組小鼠腦組織SOD、GSH-Px酶活性顯著降低(P＜0.01，P＜0.01)，而MDA含量升高明顯（P＜0.01）。F1組及F2組較D-gal組SOD酶活性升高（P＜0.01，P＜0.01）、GSH-Px酶活性明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)，而MDA含量降低（P＜0.01，P＜0.01）。⑶D-gal組小鼠大腦皮層及海

9、馬TNF-α、IL-1β著色呈棕黃色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多，平均光密度值較NC組增加，差異具有顯著性(P＜0.01，P＜0.01); F1組小鼠大腦皮層及海馬TNF-α、IL-1β著色較D-gal組稍淺，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，平均光密度值明顯減弱（P＜0.01，P＜0.01）。F2組小鼠大腦皮層及海馬TNF-α、1L-1β與D-gal組相比著色很淺，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)很少，平均光密度值明顯減弱（P＜0.01，P＜0.01）。⑷D-gal組TNF-α和IL-

10、1β較NC組升高明顯(P＜0.01，P＜0.01)，F(xiàn)1組和F2組TNF-α較D-gal組明顯降低（P＜0.01，P＜0.01），IL-1β較D-gal組明顯降低（P＜0.01，P＜0.01），F(xiàn)2組較F1組改變更為明顯(P＜0.01)。⑸D-gal組AGEs、RAGE、phospho-NF-κB蛋白表達(dá)較NC組升高明顯(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)， F1組AGEs、RAGE、phospho-NF-κB蛋白表達(dá)較D-ga