骨髓源性側(cè)群細胞的體外增殖及其向肝樣細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的:
　　1.通過觀察BMSP在體外培養(yǎng)條件下能否保持側(cè)群細胞的特性,以探討B(tài)MSP在體外擴增的可能性。
　　2.觀察在HGF定向誘導(dǎo)下大鼠BMSP轉(zhuǎn)分化的情況,初步探討HGF在大鼠BMSP轉(zhuǎn)分化為肝樣細胞中發(fā)揮的作用及機制。
　　方法:
　　1.從大鼠的股骨和脛腓骨分離骨髓細胞并制備骨髓細胞懸液,通過流式細胞儀分選獲取BMSP;用低糖DMEM﹢10％胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSP。采用RT-PCR檢測細胞中ABC

2、G-2基因表達水平。
　　2.在體外向BMSP中加入不同濃度的HGF誘導(dǎo)其向肝樣細胞分化,并分別于第3、7、14、21天,通過RT-PCR、免疫印跡法等技術(shù)檢測AFP、ALB等細胞表面標志物的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.每只SD大鼠的雙側(cè)股骨和脛腓骨所制備的骨髓細胞懸液的細胞總數(shù)約2-10×108個,經(jīng)分選可獲得5-10×105個BMSP。
　　2.BMSP在體外培養(yǎng)6小時后開始貼壁生長,細胞形態(tài)以長梭形為主

3、。隨著培養(yǎng)時間的延長,細胞生長曲線顯示第7天細胞數(shù)量最多,以后進入平臺期。第7天細胞按1:2傳代培養(yǎng),傳代后細胞于24小時內(nèi)完全貼壁,細胞傳至第10代時,細胞增殖能力仍然很強。
　　3.誘導(dǎo)分化實驗表明:一定濃度的HGF具有明顯的促進BMSP轉(zhuǎn)分化為肝樣細胞。RT-PCR檢測顯示:培養(yǎng)第3天的BMSP空白組及因子組未見AFP、ALB mRNA表達;AFP mRNA在第7天的因子組表達、ALB mRNA在因子組則不表達,空白組AFP

4、、ALB mRNA均未表達;AFP mRNA在第14天的因子組表達減弱、ALB mRNA在第14天的因子組表達,空白組AFP、ALB mRNA均未表達;第21天因子組見AFP mRNA不表達、ALB mRNA表達減弱,空白組AFP、ALB mRNA均未表達。因子組與對照組相比有顯著性差異,P<0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.通過流式細胞儀分選獲得BMSP在一定時間內(nèi)可以在體外擴增并保持干細胞的特性,且傳代的BM