Nucleophosmin-B23在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá).pdf

1、目的：B23(Nucleophosmin，NPM，numatrin，NO38)是一種多功能的核仁磷酸化蛋白，在細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖中發(fā)揮重要的作用。過去研究還表明B23可能是癌基因，在一些腫瘤中呈過表達(dá)。肝細(xì)胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是一種細(xì)胞生長(zhǎng)活躍且死亡率高的惡性腫瘤。本研究擬用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-PCR，RT-PCR)、免疫印跡(WesternBlot)及免疫

2、組織化學(xué)等技術(shù)，通過比較增殖細(xì)胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)表達(dá)，探討B(tài)23在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床病理意義。 材料和方法：收集中山大學(xué)腫瘤防治中心手術(shù)切除的10對(duì)新鮮肝細(xì)胞癌組織及對(duì)應(yīng)的癌旁肝組織，于-80℃冰箱保存，用于抽提RNA及蛋白。RT-PCR檢測(cè)B23mRNA在HCC組織及癌旁肝組織中的表達(dá)水平。WesternBlot檢測(cè)B23蛋白和PCNA蛋白在HCC組織

3、及癌旁肝組織中的表達(dá)水平。另收集中山大學(xué)腫瘤防治中心有病理檔案資料的肝手術(shù)病例：103例HCC，12例肝局灶性結(jié)節(jié)性增生，17例肝血管瘤。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)B23蛋白和PCNA蛋白在HCC組織及癌旁肝組織、肝局灶性結(jié)節(jié)性增生組織及血管瘤周圍肝組織的表達(dá)水平及其與臨床病理特征(患者性別、年齡、臨床分期、腫瘤大小、腫瘤數(shù)量、血清AFP水平、HBsAg狀況、腫瘤病理分級(jí)及是否伴有肝硬化)的關(guān)系。每例數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，分為4種染色強(qiáng)度，即：(-

4、)、(+)、(++)、(+++)。分別計(jì)算每種強(qiáng)度的百分比，轉(zhuǎn)換成Ridit值代表其表達(dá)水平。采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。 結(jié)果：1、B23在肝細(xì)胞癌組織中的高表達(dá)(1)逆轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果表明B23mRNA在HCC組織中的表達(dá)明顯高于對(duì)應(yīng)的癌旁肝組織。10對(duì)HCC組織及對(duì)應(yīng)癌旁肝組織均可檢測(cè)到B23mRNA條帶，B23mRNA在HCC組織中的表達(dá)強(qiáng)度是對(duì)應(yīng)的癌旁肝組織的1.499倍。 (2)免疫印跡結(jié)果表明

5、B23蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯高于對(duì)應(yīng)的癌旁肝組織。10對(duì)HCC組織及對(duì)應(yīng)癌旁肝組織均可檢測(cè)到B23蛋白條帶，B23蛋白在HCC組織中的表達(dá)強(qiáng)度是對(duì)應(yīng)的癌旁肝組織的2.673倍。 (3)免疫組織化學(xué)結(jié)果表明B23蛋白在HCC組織中的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于癌旁肝組織、肝局灶性結(jié)節(jié)性增生組織及血管瘤周圍肝組織。ANOVA分析表明，這四組間B23表達(dá)水平的差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。t檢驗(yàn)結(jié)果表明，B23在HCC組織中的表

6、達(dá)強(qiáng)度明顯高于其余三組(P＜0.001)。 2、B23蛋白與PCNA蛋白在HCC組織中的表達(dá)比較及其與臨床病理特征的關(guān)系 (1)免疫印跡結(jié)果表明B23蛋白和PCNA蛋白的表達(dá)在HCC組織中均明顯高于對(duì)應(yīng)癌旁肝組織中的表達(dá)。免疫組織化學(xué)結(jié)果表明B23蛋白與PCNA蛋白在HCC組織中的表達(dá)均明顯高于癌旁肝組織、肝局灶性結(jié)節(jié)性增生組織和血管瘤周圍肝組織。統(tǒng)計(jì)分析表明PCNA在四組組織中表達(dá)水平的差別具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.

7、000)，PCNA在HCC組織中的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于其他三組(P＜0.001)。進(jìn)一步分析表明B23與PCNA在這四種組織中表達(dá)強(qiáng)度具有相關(guān)性(r=0.4767，P＜0.001，R2=0.5639)。 (2)B23蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與患者血清AFP水平、腫瘤病理分級(jí)和是否伴有肝硬化之間的關(guān)系有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而與HCC患者性別、年齡、臨床分期、腫瘤大小、腫瘤數(shù)量及HBsAg之間的關(guān)系未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。PCNA