長(zhǎng)期鉛暴露對(duì)鈣介導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶損害及RyRs作用研究.pdf

1、研究目的：
　　環(huán)境重金屬鉛污染可導(dǎo)致以學(xué)習(xí)記憶損害為表現(xiàn)的神經(jīng)發(fā)育障礙和神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生。鉛和鈣同為二價(jià)金屬，具有較大的共性，可干擾鈣依賴(lài)性生化過(guò)程。研究表明鉛可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)靜息鈣升高，并與Ryanodine受體（Ryanodine receptors，RyRs）相關(guān)，提示RyRs可能是鉛的作用靶點(diǎn)。然而在神經(jīng)發(fā)育期和退化期鉛暴露模型中：鈣的變化及其介導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶損傷通路是否一致，RyRs的作用及是否一致，均未曾報(bào)道。為此，本

2、項(xiàng)目以SD大鼠為動(dòng)物模型，研究長(zhǎng)期鉛暴露對(duì)鈣介導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶損傷及RyRs的作用。
　　方法：
　　成年大鼠以雌雄2:1進(jìn)行配對(duì)，陰道涂片提示受孕成功后隨即分配至空白組（control）、低劑量組（Low lead group，LLG）和高劑量組（High lead group，HLG），分別予一蒸水、0.05％三水合醋酸鉛和0.2%三水合醋酸鉛通過(guò)飲水染毒至仔鼠斷乳（出生后3周，Postnatal week3，PNW3）。斷

3、乳后，繼續(xù)分別以一蒸水、0.01%三水合醋酸鉛和0.05%三水合醋酸鉛分別對(duì)control、LLG和HLG進(jìn)行飲水染鉛至出生后52周（一年，Postnatal week52，PNW52）。
　?。?）采用電感耦合等離子發(fā)射光譜法（Inductively coupled plasma atomic emission spectrometry，ICP-AES）檢測(cè)血鉛和海馬鉛；
　?。?）采用水迷宮系統(tǒng)（Morris water

4、 maze，MWM）評(píng)價(jià)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；
　　（3）采用流式細(xì)胞儀（Flow Cytometer）測(cè)定海馬細(xì)胞內(nèi)靜息鈣離子濃度；
　?。?）采用逆轉(zhuǎn)錄 PCR（Reverse transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)水平；
　　（5）采用蛋白印記法（Western blotting）檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：
　?。?）鉛暴露導(dǎo)致了PNW3

5、及PNW52大鼠不同程度的體重減輕，并在空白組和高劑量組間表現(xiàn)出差異性（P<0.05）。
　　（2）鉛暴露顯著增加了血和海馬鉛含量，且具有時(shí)間和濃度依賴(lài)性。
　?。?）鉛暴露使海馬神經(jīng)元內(nèi)靜息鈣離子濃度上升：不論是斷乳還是中年，鉛暴露均造成了海馬神經(jīng)元內(nèi)靜息游離細(xì)胞鈣濃度增加，除PNW3低劑量組僅上升7.49%外，其余染鉛組靜息鈣升高均超過(guò)20%且表現(xiàn)出組間差異（P<0.01）。
　?。?）鉛暴露導(dǎo)致了學(xué)習(xí)記憶損傷，表

6、現(xiàn)出染鉛組大鼠水迷宮潛伏時(shí)間延長(zhǎng)及穿越平臺(tái)次數(shù)減少。
　?。?）鉛暴露大鼠鈣介導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶蛋白和抗凋亡蛋白發(fā)生改變：PNW3低劑量組p-CaMKIIα和p-CREB表達(dá)下調(diào)；PNW3高劑量和PNW52染鉛大鼠海馬不僅p-CaMKIIα表達(dá)上調(diào)，Bcl2表達(dá)下調(diào)外，還出現(xiàn)p-CREB表達(dá)下調(diào)；本研究模型中CaMKIIα的激活扮演了學(xué)習(xí)記憶和凋亡的雙重作用。
　?。?）鉛暴露大鼠RyRs蛋白發(fā)生改變：PNW3時(shí)，高劑量RyR2表