Bmi-1和Mel-18基因在MG-132誘導(dǎo)的人HL-60細(xì)胞系凋亡中的表達(dá)變化.pdf

1、目的：Bmi-1和Mel-18都屬于Polycombgroup(Pc-G)基因家族的成員，該基因家族在機(jī)體形成，造血和控制細(xì)胞周期上發(fā)揮關(guān)鍵的作用。Bmi-1作為一種癌基因，其表達(dá)不僅為正常造血干細(xì)胞(HSC)自我更新所必需，也決定著HSC和白血病干細(xì)胞(LSC)的增生能力。而Mel-18作為一種可能的抑癌基因，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中能負(fù)調(diào)控HSC的自我更新能力，并可影響HSC的細(xì)胞周期狀態(tài)。NF-κB于原代白血病細(xì)胞中組成性激活，抑制其活性能誘

2、導(dǎo)明顯凋亡的發(fā)生。目前在人淋巴瘤的研究中發(fā)現(xiàn)Bmi-1和Mel-18均與NF-κB有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)聯(lián)系；而小鼠中Mel-18的啟動(dòng)子上游存在NF-κB的潛在結(jié)合位點(diǎn)。MG-132為一種蛋白酶體(Proteasome)抑制劑，能夠選擇性抑制NF-κB活性，從而誘導(dǎo)白血病細(xì)胞的凋亡。本實(shí)驗(yàn)主要研究Bmi-1和Mel-18在人急性髓系白血病細(xì)胞株HL-60凋亡過程中的表達(dá)變化，探討其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 方法：將HL-60細(xì)胞與一定濃度M

3、G-132進(jìn)行聯(lián)合培養(yǎng)后，按6h，9h，12h時(shí)間點(diǎn)提取樣本和對(duì)照組進(jìn)行Real-TimeRT-PCR檢測(cè)Bmi-1和Mel-18基因的表達(dá)水平，同時(shí)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀況；另于培養(yǎng)后12h用NF-κB抗體處理樣本，于共聚焦顯微鏡下確認(rèn)NF-κB受抑制情況，同時(shí)進(jìn)行初步的細(xì)胞周期流式檢測(cè)。 結(jié)果：處理前Mel-18表達(dá)位于較低水平，而Bmi-1水平較高，處理后Mel-18表達(dá)水平隨時(shí)間逐漸明顯上調(diào)，而Bmi-1水平未見明顯