成年恒河猴脊髓半橫斷損傷后腹角BDNF及其受體TrkB的表達變化.pdf

1、目的：研究成年恒河猴脊髓半橫斷損傷后腹角腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)及其高親合力受體TrkB的時空變化，探討B(tài)DNF、TrkB在脊髓損傷后修復(fù)中的可能作用，為應(yīng)用BDNF、TrkB促進脊髓損傷后的修復(fù)提供形態(tài)學(xué)資料。 方法：21只云南健康成年恒河猴(昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供)，體重5.5～6.0kg，隨機分為實驗組、假手術(shù)對照組。實驗組即脊髓半橫斷損傷組(于

2、第8胸髓節(jié)段處橫斷左側(cè)脊髓，n=18)，按術(shù)后存活時間分為2d、7d、14d、30d、60d、90d組，每組3只。假手術(shù)對照組(n=3)即打開錐板，剪開硬脊膜但不損傷脊髓，24h取材。根據(jù)改良的Tarlov評分方法，連續(xù)檢測并評價90d組成年恒河猴脊髓半橫斷損傷后的后肢運動功能。所有動物灌注固定取胸段脊髓，制作冰凍切片，分別用兔抗BDNF抗體、兔抗TrkB抗體行免疫組織化學(xué)SP法染色，觀察并計數(shù)手術(shù)斷面下段胸髓灰質(zhì)腹角BDNF、TrkB

3、免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元。根據(jù)所得數(shù)據(jù)資料的特征，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計學(xué)處理。 結(jié)果： 1．損傷后2d，左側(cè)后肢評分為0級，肌張力下降，表現(xiàn)為弛緩性癱，右側(cè)后肢為2～3級；損傷后7d，左側(cè)后肢為0～1級，右側(cè)后肢運動功能評分逐漸恢復(fù)至4級，一直保持至損傷后90d；損傷后14d～30d，左側(cè)后肢運動功能恢復(fù)至1～2級；術(shù)后60d，左側(cè)后肢功能大部分恢復(fù)至2級，足趾可有輕微抓握動作；術(shù)后90d時，左側(cè)后肢肌力恢復(fù)至2～3級，

4、小關(guān)節(jié)活動更加靈活。 2．各組成年恒河猴斷面下段胸髓灰質(zhì)腹角神經(jīng)元中均可觀察到BDNF、TrkB的免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物，呈棕黃色陽性顆粒。BDNF陽性反應(yīng)物主要存在于胞漿中，胞漿著色深，胞漿胞核界限清楚，胞核未見染色；TrkB陽性反應(yīng)物胞漿染色深，胞核著色情況不一。 3．成年恒河猴脊髓半橫斷損傷后，(1)胸髓灰質(zhì)腹角BDNF、TrkB陽性神經(jīng)元數(shù)均較假手術(shù)對照組減少(P<0.05)，且從7d組開始，BDNF和TrkB二者的表

5、達變化趨勢基本一致；(2)BDNF陽性神經(jīng)元數(shù)脊髓損傷后2d組明顯減少，7d組持續(xù)減少至最低水平，14d組陽性神經(jīng)元數(shù)則驟升，至30d組繼續(xù)升高達到脊髓損傷后的最高水平，但BDNF陽性神經(jīng)元數(shù)并未恢復(fù)到正常水平，仍少于假手術(shù)組，損傷后60d～90d則又呈持續(xù)下降趨勢。(3)TrkB陽性神經(jīng)元數(shù)在脊髓損傷后2d組亦急劇減少，隨后逐漸上升，14d組明顯增加，于30d組持續(xù)維持在高水平，損傷后60d又開始明顯下降，至90d呈持續(xù)下降趨勢。(4

6、)手術(shù)各組左右側(cè)腹角BDNF(除30d組外)、TrkB(除2d組和14d組外)陽性神經(jīng)元數(shù)均無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1．各組成年恒河猴胸髓灰質(zhì)腹角神經(jīng)元中均有BDNF和受體TrkB的表達，提示BDNF、TrkB可能在維持脊髓灰質(zhì)腹角生理功能和脊髓損傷修復(fù)方面發(fā)揮重要作用。 2．成年恒河猴脊髓半橫斷損傷后表現(xiàn)一定程度的自發(fā)性后肢功能恢復(fù)，BDNF和TrkB在脊髓損傷后的表達與假手術(shù)對照組相比存在顯著差

7、異，且在時程上與損傷后后肢功能的自發(fā)性恢復(fù)存在一定的同步性，表明BDNF、TrkB可能與脊髓損傷后后肢功能的恢復(fù)有關(guān)。 3．成年恒河猴脊髓半橫斷損傷后，胸髓灰質(zhì)腹角BDNF和TrkB免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元的表達從脊髓損傷后7d組開始，均有著驟然升高、持續(xù)增加至脊髓損傷后最高水平(30d時)、隨后又呈現(xiàn)持續(xù)下降(60d-90d時)的這種極為相近的趨勢，說明BDNF和TrkB的作用具有高度的功能協(xié)調(diào)性：BDNF必須通過高親合力受體Trk