環(huán)境激素丙烯酰胺對SD大鼠生精細(xì)胞端粒酶活性及增殖的表達(dá)影響.pdf

1、目的:
　　 丙烯酰胺(AcrylamideAA)是一種白色晶體化學(xué)物質(zhì)，為生產(chǎn)聚丙烯酰胺的原料，屬于環(huán)境雌激素的一種，廣泛應(yīng)用于水溶性聚合物和有機(jī)化學(xué)藥品的制造。日常生活中，高溫(＞120℃)烹調(diào)下，淀粉類食品很容易產(chǎn)生丙烯酰胺。人體可通過多種途徑吸收丙烯酰胺，如消化道，呼吸道及皮膚黏膜等[1]，其中消化道吸收最快。胎兒和嬰幼兒通過胎盤和乳汁也可吸收丙烯酰胺。早在20世紀(jì)80年代，科學(xué)家就已經(jīng)對丙烯酰胺的毒性有了充分的認(rèn)識(shí)，丙

2、烯酰胺可引起神經(jīng)毒性，引起嗜睡、記憶減退、失眠、幻覺等，急性中毒可出現(xiàn)遲發(fā)性的周圍神經(jīng)改變，如步態(tài)不穩(wěn)、手套樣改變、無力等。隨著2002年4月，瑞典科學(xué)家首次報(bào)道高溫加熱淀粉類食品中發(fā)現(xiàn)丙烯酰胺后，丙烯酰胺再一次引起了全世界各國科學(xué)家的關(guān)注。丙烯酰胺除上述神經(jīng)毒性外，還存在致癌性、胚胎發(fā)育毒性以及生殖毒性[2]。丙烯酰胺已被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)列入2A組“人類可能致癌物質(zhì)”[3]。丙烯酰胺的生殖毒性體現(xiàn)在許多方面，有人認(rèn)為丙烯酰

3、胺可能會(huì)誘導(dǎo)生殖細(xì)胞發(fā)生染色體突變;也有人研究認(rèn)為，丙烯酰胺可能會(huì)影響睪丸的基因表達(dá)，致使類固醇激素的轉(zhuǎn)運(yùn)以及精子的發(fā)生出現(xiàn)異常，同時(shí)，丙烯酰胺也會(huì)降低體內(nèi)的睪酮含量。雖然科學(xué)家對丙烯酰胺的生殖毒性提出了很多假設(shè)，但仍然不能完整的描述其發(fā)生機(jī)制，因此，丙烯酰胺的生殖毒性毒理研究仍有待進(jìn)一步的闡明。
　　 端粒酶是一種核糖核蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶，能以自身的內(nèi)源性RNA序列作為模板從頭合成染色體末端端粒的DNA序列。端粒酶活性與細(xì)胞的增殖潛

4、能、細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、凋亡和死亡息息相關(guān)。在人體的大多數(shù)細(xì)胞中并沒有端粒酶活性，但在干細(xì)胞、生殖細(xì)胞以及90％的腫瘤細(xì)胞中都可檢測到端粒酶活性，因此，端粒酶已作為一種細(xì)胞增殖的指標(biāo)被廣泛應(yīng)用。在生殖細(xì)胞當(dāng)中，端粒酶活性保證端粒的DNA序列始終如一的保存，這樣才能保證生殖細(xì)胞中DNA有序、穩(wěn)定的分裂并遺傳至下一代。作為DNA多聚酶δ輔助蛋白的PCNA是DNA復(fù)制過程中所必需的，具有維持DNA多聚酶高活性的作用，出現(xiàn)于G1早期，S期達(dá)到高

5、峰，G2期開始減弱，M期消失，已被公認(rèn)為反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的標(biāo)記物。本研究希望通過觀察丙烯酰胺對生精細(xì)胞端粒酶活性以及PCNA的表達(dá)影響為進(jìn)一步探討丙烯酰胺的生殖毒性提供一定的科學(xué)依據(jù)。
　　 材料和方法:
　　 1、分組:健康雄性SD大鼠40只，體重150～200g，隨機(jī)分為4組，低劑量組(20mg/kg)、中劑量組(40mg/kg)、高劑量組(60mg/kg)，陰性對照組（蒸餾水）。每日一次，每周連續(xù)應(yīng)用5d，連續(xù)2周

6、。
　　 2、染毒方法及檢測指標(biāo):各組動(dòng)物均采用經(jīng)口灌胃染毒，灌胃體積為0.01ml/g。于首次染毒后第14d脫頸椎處死，取睪丸和附睪。采用免疫組化方法測定大鼠生精細(xì)胞中的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶及PCNA的表達(dá)。
　　 3、各項(xiàng)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 結(jié)果:
　　 1、睪丸組織病理學(xué)檢測結(jié)果:對照組睪丸生精上皮細(xì)胞排列規(guī)則，低劑量組睪丸生精上皮細(xì)胞排列基本規(guī)則，中、高劑量組睪丸生精上皮細(xì)胞層數(shù)減少，各級生精細(xì)胞均

7、見減少，管腔內(nèi)成熟精子減少，管腔變大，成熟精子數(shù)量減少，組織結(jié)構(gòu)變得疏松。
　　 2、附睪中精子密度測定結(jié)果:大鼠附睪中的精子密度隨著丙烯酰胺劑量的增加而降低，低、中、高劑量組均明顯下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P＜0.05)
　　 3、生精細(xì)胞端粒酶表達(dá)測定結(jié)果:對照組端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)主要表達(dá)于精原細(xì)胞及精母細(xì)胞，表達(dá)較高。低劑量組大鼠與對照組比較端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)表達(dá)有所減少，但陽性產(chǎn)物平均吸光度比較

8、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。中、高劑量組大鼠生精細(xì)胞TERT陽性產(chǎn)物明顯減少，陽性產(chǎn)物平均吸光度與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4、生精細(xì)胞PCNA表達(dá)測定結(jié)果:對照組增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)活性主要表達(dá)于精原細(xì)胞及精母細(xì)胞，表達(dá)較高。低劑量組大鼠與對照組比較PCNA表達(dá)有所減少，但陽性產(chǎn)物平均吸光度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。中、高劑量組大鼠生精細(xì)胞PCNA陽性產(chǎn)物明顯減少，陽性產(chǎn)物平均