轉(zhuǎn)換生長因子β1（TGF-β1）抗大鼠椎間盤退行性變中細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的: 椎間盤退變疾病(disc degeneration disease，DDD)是一種發(fā)病率很高的疾病。目前認(rèn)為椎間盤退變起源于髓核，細(xì)胞過度凋亡是髓核細(xì)胞退變的一個主要原因。而生長因子撤退是細(xì)胞凋亡的一個重要誘因。有研究表明通過注射TGF-β1對于退變的椎間盤細(xì)胞有阻止其退變的作用。本研究通過觀察大鼠椎間盤退變模型在注射轉(zhuǎn)換生長因子β1(TGF-β1)后，細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞凋亡率的變化，從基因水平探討TGF-β1在

2、阻逆椎間盤退行性變中的作用。 材料與方法: 本實驗選用雄性Wistar大鼠(中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)，均重300g，共48只。隨機(jī)分為兩部分：一部分不做任何處理，共12只，稱為空白對照組；另一組制造椎間盤退變模型，共30只。造模后2周、未進(jìn)行進(jìn)一步試驗前，這兩部分分別隨機(jī)選取3只大鼠處死。第二部分剩余27只大鼠再隨機(jī)分為三個組：注射TGF-β1組、注射生理鹽水對照組、非治療組。每組共3只。此三組27只大鼠同空白對照

3、組剩余9只大鼠，每組隨機(jī)分為2周、4周、8周三個時間點。每個時間點n=3。分別處死后，每組大鼠同序列造模標(biāo)記處取新鮮組織塊。用蘇木素伊紅染色觀察椎間盤凋亡細(xì)胞的形態(tài)，用TUNEL染色觀察顯色反應(yīng)，并計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)表示細(xì)胞凋亡指數(shù)。 結(jié)果: 1 對普通光鏡下的石蠟切片HE染色進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)，造模2周后，造模的實驗動物椎間盤內(nèi)大量出現(xiàn)凋亡細(xì)胞，證實造模成功。而在注射TGF-β12周后，TGF組的椎間盤凋亡細(xì)胞開始減少，說明細(xì)胞

4、已經(jīng)開始修復(fù)。而與之對應(yīng)，鹽水組、非治療組的凋亡細(xì)胞未見減少。4周、8周后，TGF組的凋亡細(xì)胞進(jìn)一步減少，而鹽水組和非治療組的凋亡細(xì)胞依然未見減少。2用原位凋亡試劑盒對石蠟包埋標(biāo)本進(jìn)行檢測，計算凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)。造模后2周，造模組AI同空白對照組AI相比差異顯著(P<0.01)，證明造模成功。注射TGF-β1后的每個時間點，TGF組同鹽水組、非治療組之間相比差異顯著(P<0.01)，均有統(tǒng)計學(xué)意義；鹽水組

5、同非治療組之間相比無明顯差異(P>0.05)，無統(tǒng)計學(xué)意義；TGF組每時間點之間相比差異顯著，(P<0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義；而TGF組、鹽水組、非治療組同空白對照組之間相比差異亦顯著(P<0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1．本研究通過觀察大鼠椎間盤退變模型在注射轉(zhuǎn)換生長因子β1(TGF-β1)后，細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞凋亡率的變化，發(fā)現(xiàn)TGF-β1具有抗椎間盤退變細(xì)胞凋亡的作用。 2．TGF-β1不能完