銀杉再生體系、擬菌根誘導(dǎo)系及秦嶺冷杉菌根誘導(dǎo)系的建立.pdf

1、銀杉(CathayaargyrophyllaChunetKuang)和秦嶺冷杉(AbieschensiensisVanTiegh.)是我國瀕危的松科植物，分別為國家一級和二級保護(hù)植物。由于種群自然更新能力低下，它們己處于嚴(yán)重的瀕危及漸危狀態(tài)。本課題利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，探討并建立了銀杉再生植株誘導(dǎo)體系，對改善該樹種的瀕?，F(xiàn)狀和開展其它研究工作奠定了良好的理論和技術(shù)基礎(chǔ)；結(jié)合菌根學(xué)研究方法和組織培養(yǎng)技術(shù)，誘導(dǎo)出了銀杉組織和器官水平上的擬菌

2、根結(jié)構(gòu)，為該物種的其它基礎(chǔ)研究提供了有用的實驗體系；建立了秦嶺冷杉的人工菌根誘導(dǎo)系。本研究為尋找一條瀕危松科植物種群復(fù)壯的途徑提供了有用的信息。 1.銀杉再生植株誘導(dǎo)體系的建立利用銀杉幼苗的莖和根作為外植體，在含有0.5mg/LBA和2.0mg/L2,4-D的改良MS(MMS)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出了不定芽，而且發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)8周幼苗的莖段分化率最高，達(dá)到了35.3％；將已發(fā)芽的銀杉幼苗培養(yǎng)在含有0.2mg/LBA和0.02mg/LNAA的M

3、MS培養(yǎng)基中，只在萌發(fā)后3-4d幼苗的莖部直接誘導(dǎo)出了不定芽。隨后，在添加了0.03％活性炭和13.3g/L蔗糖、大量元素為MMS培養(yǎng)基的1/2、其它元素與MMS相同的改良MMS培養(yǎng)基中，不定芽得到了伸長，并在含有0.5mg/LNAA的MMS培養(yǎng)基中生根，生根率為37.5％。將生根后的再生植株栽培在日光溫室中的人工基質(zhì)(珍珠巖∶蛭石∶園土=1∶2∶3)內(nèi)，其長勢良好，建立了銀杉的再生植株誘導(dǎo)體系。 2.銀杉擬菌根誘導(dǎo)系的建立將銀

4、杉莖段誘導(dǎo)出的愈傷組織和去根幼苗上分化出的不定根與土生空團菌(Cenococcumgeophilum)共培養(yǎng)在含有0.1g/L葡萄糖的MMS培養(yǎng)基中，建立了銀杉與土生空團菌的離體擬菌根培養(yǎng)系。愈傷組織接種4周后，在其細(xì)胞間隙可以看到菌絲以及網(wǎng)狀菌絲體，但接種8周后沒有形成典型的哈蒂氏網(wǎng)，而是一種初級的擬菌根結(jié)構(gòu)：而不定根接種8周后，可以觀察到明顯的菌絲套和哈蒂氏網(wǎng)，形成了典型的擬菌根。本研究首次在無菌條件下誘導(dǎo)形成了銀杉根、愈傷組織與外

5、生菌根真菌的擬菌根，這個培養(yǎng)系統(tǒng)的建立為進(jìn)一步研究銀杉菌根提供了良好的實驗系。 3.秦嶺冷杉人工菌根誘導(dǎo)系的建立利用離體培養(yǎng)方式誘導(dǎo)了秦嶺冷杉與土生空團菌外生菌根的形成。秦嶺冷杉的種子經(jīng)過70％灑精、0.2％HgCl2溶液以及30％H2O2溶液的多重表面消毒后，發(fā)芽率達(dá)到了33.3％，并得到了生長良好的幼苗。將土生空團菌接種于萌發(fā)后培養(yǎng)8周的秦嶺冷杉幼苗的側(cè)根旁，10-11周后，可以觀察到典型的外生菌根特征，即側(cè)根上有由外延菌絲