包菜立枯絲核菌球腐病的病原學(xué)研究.pdf

1、球腐病是在包菜上發(fā)生的一種重要病害，能引起整個包菜葉球的腐爛，嚴重影響包菜的產(chǎn)量與品質(zhì)。該病多年來由于流行范圍不廣，造成的經(jīng)濟損失不大，一直未引起研究者對此病的關(guān)注，國內(nèi)外也僅有關(guān)于此病的病原初報。近年來在湖北長陽高山蔬菜生產(chǎn)基地頻繁發(fā)生該病，并造成了嚴重的經(jīng)濟損失。本研究旨在確定引起包菜球腐病的病原，了解病菌的寄主范圍、生物學(xué)特性以及進行殺菌劑的初步篩選和測定部分栽培品種的抗性，并觀察了病菌對包菜葉片的侵入過程及在此過程中包菜葉片內(nèi)胞

2、壁降解酶活性的變化。研究結(jié)果如下： 從包菜病株上分離得到的菌株在PDA平板上培養(yǎng)3天后菌落直徑為9cm左右。菌絲初為無色，成熟后逐漸變?yōu)楹稚＞z直徑4.90-7.98μm，直角或銳角分枝，分枝處明顯縊縮，距分枝不遠處有一隔膜，菌絲細胞多核。菌核顆粒狀、褐色，內(nèi)外顏色一致。剛分離菌株接種離體包菜葉片后葉片上出現(xiàn)黑褐色圓形至不規(guī)則形病斑，與田間發(fā)病癥狀相同，從接種發(fā)病的葉片上分離到的菌株與接種所用菌株的培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征相同，證實

3、該菌株為致病菌。rDNA-ITS測序結(jié)果與GeneBank中的序列進行同源性比較發(fā)現(xiàn)菌株與Thanatephoruscucumeris和Rhizoctoniasolani序列的同源性高達99％，且融合群為AG2-1。根據(jù)形態(tài)學(xué)特征和分子鑒定結(jié)果，確認該病原菌為RhizoctoniasolaniAG2-1。 病原菌生物學(xué)特性研究結(jié)果表明，病菌在有無光照的條件下均可生長和形成菌核，光照和光暗交替最有利于菌絲的生長，黑暗條件下有利于菌

4、核形成。該菌株在5-30℃的范圍內(nèi)均能生長和產(chǎn)孢，25℃為菌絲生長最適溫度。病菌在pH值為4-10的PDA培養(yǎng)基上菌絲均能正常生長，其中以pH6-7生長最快。病菌能夠有效利用多種碳源和氮源，分別以淀粉為碳源以及以酵母膏為氮源時生長最好。試驗證明45℃的溫水處理10min可殺死菌絲體、50℃的溫水處理10min可抑制菌核萌發(fā)。PDA平板抑菌實驗結(jié)果表明，供試六種藥劑在設(shè)置的不同濃度下對病原菌的生長都有一定的抑制作用，其中10％愛苗乳油和5

5、0％多菌靈可濕性粉劑對菌絲生長有很好的抑制效果，10％世高可分散粒劑抑制效果最差。 寄主范圍測定結(jié)果表明，病菌能侵染5種十字花科植物，包括包菜、大白菜、小白菜、蘿卜、油菜，還能侵染豌豆、蠶豆、番茄、棉花、黃瓜和玉米。對14種栽培品種的抗性測試結(jié)果表明，兩關(guān)、永明、冠軍較為抗病，12089和7001較為感病。 用菌絲塊接種離體包菜葉片，接利后不同時間點取樣，對樣品進行組織脫色、染色，觀察病原菌對寄主植物的侵染過程。結(jié)果表明

6、，接種9h后病原菌開始侵入寄主，病菌能通過表皮和氣孔兩種方式侵染葉片，后期氣孔侵入的比率逐漸增加。侵染過程中病原菌可產(chǎn)生侵染菌絲直接侵入，也可形成球形附著胞、分枝狀附著胞和侵染墊后再侵入。接種24h后寄主的葉肉細胞被大量降解。 測定各接種時間點包菜葉片內(nèi)病原菌產(chǎn)生的胞壁降解酶活性，結(jié)果表明，接種后葉片內(nèi)4種胞壁降解酶(纖維素酶、多聚半乳糖醛酸酶、果膠裂解酶、果膠酯酶)的活性較接種前顯著增強。接種12h后4種酶的酶活均呈現(xiàn)出加速上

7、升的趨勢，纖維素酶和多聚半乳糖醛酸酶在24h時酶活均為對照葉片的2倍多。各酶均在36h到48h達到酶活的高峰，隨后酶活逐漸下降。其中48h時纖維素酶的活性是對照葉片的2.64倍，36h時多聚半乳糖醛酸酶的活性是對照葉片的2.62倍，48h時果膠酯酶和果膠裂解酶的酶活為對照葉片的1.65和1.59倍。葉片接種96h后，測定病斑周圍黃褐色區(qū)域和中間黑色區(qū)域的胞壁降解酶活性，分析結(jié)果顯示，在兩個區(qū)域中纖維素酶和多聚半乳糖醛酸酶的酶活都顯著高于