豬塞內(nèi)加谷病毒(SVV)的分離鑒定及致病性研究.pdf

1、豬塞內(nèi)加谷病毒（SVV）屬于小核糖核酸病毒科（Picornaviridae） Senecavirus病毒屬成員，可引起豬鼻鏡及蹄冠處出現(xiàn)水皰、潰爛創(chuàng)面從而導致跛足甚至死亡。本研究采用傳代細胞(豬腎細胞)從豬組織器官研磨物中分離出4株SVV，分別命名為SVV CH-01-2015、SVVCH-02-2015、SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015。并對4株SVV中國分離株進行全基因組序列測定。根據(jù)發(fā)表在GenBank

2、SVV保守序列3C基因，設(shè)計特異性引物和探針；構(gòu)建含3C基因序列的重組質(zhì)粒作為陽性標準品，建立針對SVV檢測的TaqManReal-Time PCR檢測方法。將SVV細胞分離株攻毒4日齡健康仔豬，觀察臨床癥狀、病理變化，檢測感染動物組織器官中的病毒載量。
　　病毒分離鑒定結(jié)果表明：病毒分離液在第一代24 h后即可產(chǎn)生CPE，隨著傳代次數(shù)的增加，出現(xiàn)CPE的時間縮短，細胞病變程度亦隨之加劇，且可在PK-15細胞上穩(wěn)定增殖。全基因組序

3、列比對結(jié)果表明，SVV CH-01-2015與 SVV CH-02-2015、CH-03-2015、SVV CH-04-2015的相似性為97.6％；SVV CH-02-2015與SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015的相似性為99.9%；SVV CH-03-2015與SVV CH-04-2015的相似性為100%。4株SVV中國分離株與2008年美國分離株SVV-001相比，相似性為94.3%-94.4%之間；SV

4、V CH-01-2015與2015年美國新分離株USA/IA46008/2015和USA/IA40380/2015相似性均為96.8%；SVV CH-02-2015、SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015與2015年美國新分離株USA/IA46008/2015和USA/IA40380/2015相似性均為98.0%；SVV CH-01-2015與2015年巴西新分離株SVV/BRA/GO3/2015、SVV/BRA/M

5、G1/2015、SVV/BRA/MG2/2015相似性均為97.1%；SVV CH-02-2015、SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015與2015年巴西新分離株SVV/BRA/GO3/2015、SVV/BRA/MG1/2015、SVV/BRA/MG2/2015相似性均為98.2%；SVV CH-01-2015與SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015與加拿大株11-55910-3相似性均為96.7

6、%；SVV CH-02-2015與加拿大株11-55910-3相似性均為96.6%。4株SVV中國分離株均位于Senecavirus病毒屬，與Senecavirus病毒屬毒株同源性最高，由此可以確定所分離到的4株均屬于Senecavirus病毒屬。
　　TaqMan Real-Time PCR檢測方法的結(jié)果顯示，TaqMan Real-Time PCR用標準品所構(gòu)建的標準曲線相關(guān)系數(shù)（R2）達到0.999以上；可以檢測到標準品下限

7、濃度為1×102copies/μL；只以SVV的cDNA為模板的反應(yīng)呈現(xiàn)陽性熒光信號，而以其它病毒的cDNA/DNA為模板所進行的Real-Time PCR均未檢測到陽性熒光信號；組內(nèi)與組間試驗的變異系數(shù)均在0.96以下。本研究建立的TaqMan Real-Time PCR方法靈敏度高，特異性強，重復性好。TaqMan Real-Time PCR檢測方法的成功建立，為SVV的定性檢測和定量分析提供了有效的技術(shù)平臺。
　　動物致病性