大柴胡湯和桂附地黃方的化學(xué)成分指紋圖譜研究.pdf

1、質(zhì)量控制是影響中藥現(xiàn)代化發(fā)展的關(guān)鍵問(wèn)題，由于中藥成分復(fù)雜，就要求建立的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)既是全面的、整體的，又是有層次的，指紋圖譜就是這樣一種表達(dá)中藥復(fù)雜體系的合適的整體表征模式。
　　1、大柴胡湯的化學(xué)成分指紋圖譜研究
　　大柴胡湯是我國(guó)中藥的傳統(tǒng)名方，由柴胡、芍藥、半夏、生姜、大棗、枳實(shí)、黃芩、大黃八味藥組成。據(jù)《傷寒論》所述，取柴胡24g、黃芩9g、清半夏9g、白芍9g、枳實(shí)12g、干姜15g、大黃6g和大棗4枚，加水240

2、0mL，武火煮沸后文火煎煮直至濃縮到1200mL，棄去藥渣，繼續(xù)煎煮濃縮至600mL。得到湯劑后，70％乙醇沉淀處理，得到大柴胡湯70％乙醇和粗多糖兩個(gè)部位。
　　大柴胡湯70％乙醇部位樣品經(jīng)冷凍干燥后，用50％甲醇溶解，進(jìn)行HPLC分析，經(jīng)過(guò)條件的摸索、方法學(xué)驗(yàn)證，最終建立了大柴胡湯70％乙醇部位的HPLC指紋圖譜。隨后，通過(guò)對(duì)比單味藥材的HPLC圖，對(duì)大柴胡湯中特征色譜峰的來(lái)源進(jìn)行了確認(rèn)，并運(yùn)用(I)on Trap LC/MS

3、技術(shù)對(duì)25個(gè)特征色譜峰中的16個(gè)進(jìn)行了指認(rèn)，指認(rèn)結(jié)果包括芍藥苷、橙皮苷、黃芩苷、柴胡皂苷A等主要有效成分。
　　對(duì)于大柴胡湯粗多糖部位，我們進(jìn)一步采用“TFA全水解-PMP柱前衍生化-HPLC檢測(cè)”的方法建立了大柴胡湯多糖部位指紋圖譜，并通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，對(duì)各個(gè)色譜峰進(jìn)行了指認(rèn)。
　　為了進(jìn)一步對(duì)大柴胡湯進(jìn)行質(zhì)量研究，達(dá)到從源頭上的有效監(jiān)控，我們建立了枳實(shí)、枳殼、大黃的70％乙醇部位化學(xué)成分指紋圖譜，運(yùn)用Ion Trap L

4、C/MS技術(shù)對(duì)主要色譜峰進(jìn)行了指認(rèn)，并結(jié)合市售的中藥飲片，做了相應(yīng)的分析和評(píng)價(jià)。得到如下結(jié)論:1、市售枳實(shí)、枳殼多數(shù)產(chǎn)自山西，雖然產(chǎn)地一樣，但從化學(xué)成分指紋圖譜中可以發(fā)現(xiàn)，某些市售枳實(shí)缺失柚皮苷和新橙皮苷兩個(gè)主要黃酮類成分，這正是枳實(shí)中重要的功效部位，而《中國(guó)藥典》中以辛弗林作為枳實(shí)的檢測(cè)指標(biāo)，這種單一指標(biāo)法是無(wú)法將此類枳實(shí)鑒別出來(lái)的;2、枳實(shí)、枳殼是在宋代以后才被明確區(qū)分，雖藥效有所差異，但它們的化學(xué)成分基本一致，二者的指紋圖譜相似度

5、非常高，相似度軟件無(wú)法區(qū)分，通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，運(yùn)用系統(tǒng)聚類分析、主成分分析兩種數(shù)據(jù)分析方法可以將枳實(shí)、在一定程度上區(qū)分開(kāi)來(lái);3、市面上所售的大黃多來(lái)自于甘肅和青島，它們的化學(xué)成分指紋圖譜穩(wěn)定且相似度非常高，但在我們鑒定的所有樣品中，有一組因多出個(gè)別較大的色譜峰而被與其他樣品區(qū)分開(kāi)，《中國(guó)藥典》以大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚以及大黃素甲醚的總含量來(lái)作為大黃的質(zhì)量控制指標(biāo)，這種方法很難將此類樣品檢測(cè)出來(lái)。從以上結(jié)果可以看出，在對(duì)大柴胡湯進(jìn)行

6、質(zhì)量控制的過(guò)程中，單味藥的選取和監(jiān)控也十分重要。
　　2、桂附地黃方的化學(xué)成分指紋圖譜研究
　　桂附地黃方由熟地黃、山藥、山茱萸、茯苓、澤瀉、丹皮、附子（制）、肉桂八種單味藥材以8∶4∶4∶3∶3∶3∶1∶1的比例制成。桂附地黃方的劑型除了最常見(jiàn)的丸劑（包括水蜜丸和濃縮丸）外，還有口服液、膠囊等，雖然劑型不同，但復(fù)方組成基本一致。市面上所售的桂附地黃方類藥物多是以馬錢(qián)苷和丹皮酚含量作為它們的質(zhì)量控制指標(biāo)，這種方法很難反映中藥

7、的整體性和復(fù)雜性。因此我們建立了桂附地黃方化學(xué)成分的指紋圖譜，試評(píng)價(jià)市售桂附地黃丸的質(zhì)量。
　　桂附地黃方生藥粉碎處理后，考察不同溶劑的提取，最終選擇無(wú)水乙醇作為桂附地黃方的提取溶劑，有兩點(diǎn)原因:一是以無(wú)水乙醇作為提取溶劑，提取率高，提取的化學(xué)成分更為完全;二是對(duì)于市售的丸劑，以無(wú)水乙醇作為提取溶劑可使提取物受輔料的影響最小。得到無(wú)水乙醇提取液后，為了盡可能地避免前處理對(duì)其化學(xué)成分的影響，我們將提取液蒸干復(fù)溶后直接進(jìn)行HPLC分析

8、，建立了桂附地黃方乙醇部位化學(xué)成分指紋圖譜。通過(guò)對(duì)比單味藥材的色譜圖，對(duì)其中主要色譜峰的來(lái)源進(jìn)行了確認(rèn)，并運(yùn)用Ion Trap LC/MS技術(shù)確認(rèn)了其中6個(gè)色譜峰。
　　桂附地黃方的丸劑是市面上最為常見(jiàn)的藥物之一，臨床應(yīng)用也十分廣泛，在已建立的指紋圖譜基礎(chǔ)上，我們對(duì)10家藥廠所售的10個(gè)桂附地黃濃縮丸樣品進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)。通過(guò)相似度計(jì)算、系統(tǒng)聚類分析和主成分分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，我們可以得到結(jié)論:總體上來(lái)看，市售桂附地黃丸與傳統(tǒng)桂附地

9、黃方質(zhì)量一致性良好，但市售桂附地黃丸之間、市售桂附地黃丸與桂附地黃方之間存在不同程度的差異，這種情況可能與單味藥材來(lái)源不同、工廠大規(guī)模生產(chǎn)工藝不同等有關(guān)。
　　桂附地黃方生藥粉碎處理后，用乙醇對(duì)水提取液進(jìn)行沉淀，制得桂附地黃丸方粗多糖部位，進(jìn)一步采用“TFA全水解-PMP柱前衍生化-HPLC檢測(cè)”的方法建立了桂附地黃方多糖部位指紋圖譜，并通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，對(duì)各個(gè)色譜峰進(jìn)行了指認(rèn)。同樣的，我們也在此基礎(chǔ)上對(duì)10家藥廠所售的10個(gè)桂附

10、地黃濃縮丸進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)。通過(guò)一系列的數(shù)據(jù)處理得到結(jié)論:市售桂附地黃丸與桂附地黃方的多糖組成質(zhì)量一致性很好，且市售桂附地黃丸的多糖質(zhì)量也非常穩(wěn)定。
　　3、總結(jié)
　　本文中所建立的指紋圖譜均是提取了一段波長(zhǎng)的色譜峰，可以在一張譜圖上得到該波長(zhǎng)范圍內(nèi)所有物質(zhì)的最大吸收峰，該方法彌補(bǔ)了單波長(zhǎng)測(cè)定指紋信息少、多波長(zhǎng)測(cè)定圖譜表征不方便的不足，避免了多波長(zhǎng)指紋圖譜融合技術(shù)所造成的誤差，這在以往的指紋圖譜相關(guān)文獻(xiàn)中未見(jiàn)報(bào)道。