小劑量阿糖胞苷聯(lián)合Flt-3L、TPO誘導(dǎo)慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞分化為漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞及其功能研究.pdf

1、目的：漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(Plasmacytoid dendritic cells，pDC)在體內(nèi)作為樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)的一個(gè)亞型，發(fā)揮著重要的免疫學(xué)效應(yīng)，是近來(lái)研究的熱點(diǎn)。pDC在其不成熟的前體階段，受到病毒或CpG寡聚多氧核苷酸(CpG ODNs)刺激后能產(chǎn)生大量的干擾素a(interferon-a，IFN-a)，發(fā)揮非特異的免疫學(xué)效應(yīng)；在通過(guò)病毒、CpG ODN刺激或CD40L、IL-3作用分化成熟

2、后，具有一定的抗原遞呈功能而獲得適應(yīng)性免疫效應(yīng)，是連接先天的非特異性免疫與后天獲得性免疫的橋梁。在體外，通過(guò)FLT-3L聯(lián)合TPO能夠從造血干細(xì)胞(haemopoietic stem cell，HSC)成功培養(yǎng)出pDC，為人們研究其功能提供了方便。慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是造血干細(xì)胞的惡性增殖性疾病，患者體內(nèi)存在著一系列的免疫學(xué)異常。IFN-a治療CML療效確切，能使一部分患者獲得細(xì)胞

3、遺傳學(xué)緩解及分子生物學(xué)緩解。小劑量阿糖胞苷(low dose cytosineara binoside，LD-Ara-C)聯(lián)合干擾素治療的療效明顯優(yōu)于單用干擾素治療，所以我們?cè)O(shè)想是否LD-Ara-C在患者體內(nèi)有改善免疫功能異常的作用，LD-Ara-C對(duì)CML源性的pDC的分化、成熟及功能是否有影響?因此，我們用LD-Ara-C聯(lián)合FLT-3L、TPO培養(yǎng)CML源性的造血干細(xì)胞分化成為CML 性的pDC，來(lái)研究探討LD-Ara-C治療CM

4、L可能的免疫機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)。 方法：Ficoll密度梯度離心法分離初診未治的CML患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞(bonemarrow mononuclear cell，BMMNC)，將所得細(xì)胞分別加入不同劑量Ara-C(實(shí)驗(yàn)組A：5ng/mlAra-C；實(shí)驗(yàn)組B：10ng/mlAra-C；實(shí)驗(yàn)組C:25ng/mlAra-C；實(shí)驗(yàn)組D：50ng/mlAra-c)，并以不加Ara-C為對(duì)照組，同時(shí)加入Flt-3、TPO誘導(dǎo)培養(yǎng)2

5、5天；倒置顯微鏡及光鏡觀察pDC形態(tài)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志(CD4，CD123，BDCA-2)；加入流感疫苗后ELISA法檢測(cè)上清液中IFN-α濃度。 結(jié)果：CML-MNC在培養(yǎng)25天后，細(xì)胞聚集成簇，體積明顯增大，胞漿豐富，具有漿細(xì)胞樣細(xì)胞的形態(tài)；瑞氏-吉姆染色光鏡下可見(jiàn)偏心的核，顯示漿細(xì)胞樣形態(tài)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明：p D C特征性表面分子(CD4，CD123，BDCA-2)的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組B和實(shí)驗(yàn)組A明顯高于對(duì)照組，差

6、異具有顯著性(p<0.05)；其中實(shí)驗(yàn)組B高于實(shí)驗(yàn)組A(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)組C細(xì)胞大部分死亡，實(shí)驗(yàn)組D細(xì)胞全部死亡。分泌IFN-α的量由強(qiáng)到弱分別為：實(shí)驗(yàn)組B>實(shí)驗(yàn)組A>對(duì)照組>實(shí)驗(yàn)組C，差異均有顯著性(p<0.05)。 結(jié)論：LD-Ara-C聯(lián)合Flt-3、TPO可以促使CML細(xì)胞誘導(dǎo)分化為pDc，增強(qiáng)其特征性表面分子表達(dá)，提高其經(jīng)流感疫苗刺激后IFN-a的產(chǎn)量。提示LD-Ara-C可以增加體內(nèi)pDC的量、也能增加內(nèi)源性IF