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1、中國疾病預防控制中心博士學位論文苯并(a)芘致人胚肺成纖維細胞周期動力學改變及其關(guān)卡阻滯機制研究姓名:嚴麗萍申請學位級別:博士專業(yè):勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學指導教師:陶茂萱20070701中國疾病預防控制中心博士學位論文2、體外培養(yǎng)細胞惡性轉(zhuǎn)化實驗是較好的研究化學物致癌機制的模型,本研究嘗試建立BaP惡性轉(zhuǎn)化的HELF細胞模型,研究細胞周期機制在腫瘤引發(fā)和形成過程中所起的作用。本研究以20~4001amol/LBaP多次處理HELF細胞,并
2、采取多項指標對BaP轉(zhuǎn)化過程中的細胞進行鑒定。3、以2、10和50lamoFLBaP對處于對數(shù)生長期的未同步化的HELF細胞作用4h,分析作用后不同時間細胞周期的分布,并分析BaP對腫瘤細胞系和永生化細胞系周期的影響。4、為避免占細胞比例較多的G1期細胞對其他時相細胞的反應(yīng)的掩蓋,本研究通過血清饑餓法和接觸抑制法同步化GO期細胞,分析血清再刺激或傳代后細胞周期的動態(tài)改變,獲得處于各時相的細胞;并以2、10和50lamol/LBaP針對同
3、步于各期的HELF細胞作用,分析周期分布的改變。從細胞周期調(diào)控蛋I蘭tcyclins、p53、p21、p16、Rb和E2F1蛋白表達改變的角度對細胞周期進程調(diào)控機制和BaP致HELF細胞周期改變的機制進行探討。研究結(jié)果1、低濃度(0~50lxmol/L)BaP(/一S9)短時間(4h)處理HELF細胞,能夠產(chǎn)生較低的細胞毒性和明顯的遺傳損傷效應(yīng)。經(jīng)過20h的修復,未經(jīng)S9代謝活化的BaP對細胞產(chǎn)生的遺傳損傷基本恢復,經(jīng)過S9代謝活化后產(chǎn)
4、生的遺傳損傷雖然修復明顯但仍然能被彗星實驗靈敏地檢出。101xmol/L是BaP毒性最明顯的劑量。BaP致DNA損傷后細胞活性抑制最明顯的時間段為處理結(jié)束12h一24h,48h后細胞活性逐漸恢復。2、BaP處理后,細胞出現(xiàn)了生長速度加快、生長時限延長(約10代,30天)、細胞核深染、轉(zhuǎn)化灶形成和四倍體核型等部分轉(zhuǎn)化細胞性狀,但細胞未能獲得錨著非依賴生長能力,端粒酶未激活,未能越過生長極限而獲得永生化。3、BaP處理后12h、24h和36
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