ASK1介導(dǎo)的MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在脊髓缺血再灌注中作用的基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的： 研究細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1，ASK1)介導(dǎo)的絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在脊髓缺血再灌注損傷中的作用，并從分子水平初步探討脊髓缺血再灌注中ASK1的活化機(jī)制。 方法： 20只新西蘭大白兔隨機(jī)分為對(duì)照組、缺血30分鐘/再灌注15分鐘組、缺血30分鐘/再灌注

2、1小時(shí)組、缺血30分鐘/再灌注24小時(shí)組，應(yīng)用腹主動(dòng)脈阻斷法制作兔脊髓缺血再灌注損傷模型。光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡觀察脊髓形態(tài)學(xué)變化；Western blot檢測(cè)脊髓蛋白中細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1，ASK1)、c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase，JNK)、p38的表達(dá)及活化；免疫共沉淀法(immunoprecipitation，IP)

3、分析ASK1與14-3-3蛋白間的結(jié)合與分離：免疫組織化學(xué)染色(immunohistochemistry)法測(cè)定活化的ASK1(phospho-ASK1，pASK1)及14-3-3在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的定位表達(dá)。 結(jié)果： 與對(duì)照組相比，HE染色顯示缺血30分鐘/再灌注15分鐘脊髓組織、神經(jīng)細(xì)胞無明顯異常，而缺血30分鐘/再灌注1小時(shí)及24小時(shí)脊髓間質(zhì)片狀出血，神經(jīng)細(xì)胞明顯腫脹；電子顯微鏡觀察顯示對(duì)照組及缺血30分鐘/再灌注15分

4、鐘神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，而缺血30分鐘/再灌注1小時(shí)及24小時(shí)神經(jīng)細(xì)胞核濃縮、染色質(zhì)聚邊、髓質(zhì)脫髓鞘；Western blot顯示ASK1及其下游蛋白JNK、p38在脊髓缺血30分鐘/再灌注1小時(shí)及再灌注24小時(shí)實(shí)驗(yàn)組顯著活化；免疫共沉淀顯示ASK1活化時(shí)，14-33與ASK1發(fā)生蛋白分離；免疫組織化學(xué)染色提示脊髓缺血再灌注時(shí)，pAsK1及14-3-3在神經(jīng)細(xì)胞漿內(nèi)的定位發(fā)生改變，兩者存在分離現(xiàn)象。 結(jié)論： 通過ASK1介導(dǎo)