APL診斷懸浮陣列分析性能測試.pdf

1、APL是急性白血病的一種，都有t(15,17)的易位，形成了新的PML/RARα融合基因，編碼PML/RARα融合蛋白，所以檢測患者體內(nèi)的PML/RARα融合蛋白的含量可以做為一種新的APL的診斷方法。
　　 首先通過調(diào)整各種單體用量和反應(yīng)溫度、時間等單因素條件，確定了最優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案。最佳反應(yīng)條件為：反應(yīng)溫度70℃、AIBN加入量1g、苯乙烯加入量21g，制備了平均直徑5.4微米的表面活性化的聚苯乙烯微球。掃描電鏡顯示微球表面

2、光滑，直徑在5.4μm左右，分散性好。接著使用FITC對微球進(jìn)行了熒光編碼，編碼了三色微球，形成三元陣列，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢驗(yàn)性能穩(wěn)定。高亮微球包被N-19抗體，用來捕獲PML/RARα融合蛋白。中亮微球包被c-abl 24-11抗體，用來捕獲ABL參考蛋白。低亮微球包被CML融合蛋白BCR-ABL捕獲抗體G6作為陰性對照。包被完成經(jīng)洗滌后，將三色微球混合，再加入NB4細(xì)胞提取物共孵育。孵育完成后經(jīng)洗滌重懸于緩沖液中，再加入RARα C-2

3、0抗體和c-abl H-300抗體共孵育。RARα C-20做為融合蛋白的報道抗體，c-abl H-300做為參考蛋白的報道抗體。最后再加入goat anti-rabbit lgG-PE抗體在緩沖液中共孵育。PE標(biāo)記的抗體用來表示報道抗體結(jié)合到蛋白的水平，數(shù)值通過流式細(xì)胞儀定量的PE分子熒光強(qiáng)度來評價。樣品使用Cell Quest Pro軟件分析PE的熒光強(qiáng)度。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該三元陣列中高亮陣列可以特異識別PML/RARα