參與及加重肺炎的重要因素-氧化應激—DNA損傷.pdf

1、目的：研究肺炎患者機體中氧化應激水平、抗氧化能力及其細胞DNA損傷情況的相應改變,探討氧化應激—DNA損傷在肺部炎癥中可能發(fā)生的作用。
　　方法：收集2011年10月至2012年1月瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院部肺炎患者67例,其中細菌性肺炎62例,真菌性肺炎3例,支原體性肺炎2例,分為肺炎組35名,重癥肺炎組32名,招募16名健康志愿者作為正常對照組。對其中64名患者及16名志愿者分別進行無菌靜脈取血2毫升,對剩下的3名肺炎組

2、患者分別行經(jīng)纖維支氣管鏡氣道組織鉗取活檢,光鏡下觀察氣道組織炎癥細胞浸潤情況,普通熒光顯微鏡觀察氣道組織ROS染色情況;對64名患者和16名志愿者分別行共聚焦熒光顯微鏡ROS檢測測定各組人外周血淋巴細胞(Lym)氧化應激程度,全波長分光光度計(酶標儀)ROS檢測測定各組人外周血淋巴細胞(Lym)氧化應激程度,留取血清行全波長分光光度計(酶標儀)血清SOD檢測測定各組抗氧化水平,普通熒光顯微鏡觀察彗星實驗測定各組人外周血淋巴細胞(Lym)

3、DNA損傷情況。
　　結(jié)果：1.光鏡觀察:人氣道組織冰凍切片HE染色,正常對照組支氣管平滑肌及血管周圍未見炎性細胞浸潤或較少浸潤;肺炎組患者支氣管平滑肌及血管周圍存在炎性細胞浸潤。
　　2.普通熒光顯微鏡觀察:人氣道組織冰凍切片ROS探針染色,正常對照組支氣管紅色熒光強度較弱,肺炎組患者支氣管紅色熒光強度明顯強于正常對照組。
　　3.共聚焦熒光顯微鏡ROS(DCF)測定淋巴細胞(Lym)氧化應激程度:各組的平均熒光強度

4、(average fluorescent intensity)肺炎組(3.308±0.240)、重癥肺炎組(6.628±0.349)均高于正常對照組(1.505±0.352)(P<0.01),以重癥肺炎組最高(P<0.01),各組間有顯著性差異(P<0.01)。
　　4.彗星實驗(COMET SOP)測定淋巴細胞(Lym)DNA損傷情況:各組細胞平均拖尾長度(average tail length)肺炎組(6.783±5.015)

5、、重癥肺炎組(30.363±7.436)均高于正常對照組(0.095±0.123)(P<0.05),以重癥肺炎組最高(P<0.01),各組間有顯著性差異(P<0.05)。
　　5.全波長分光光度計(酶標儀)血清SOD測定機體抗氧化水平:各組的平均光密度值(average optical density,OD值)肺炎組(0.225±0.030)、重癥肺炎組(0.159±0.033)均低于正常對照組(0.456±0.024)(P﹤0.

6、01),以重癥肺炎組最低(P﹤0.01),各組間有顯著性差異(P﹤0.01)。
　　6.全波長分光光度計(酶標儀)ROS測定淋巴細胞(Lym)氧化應激程度:各組的平均光密度值(average optical density,OD值)肺炎組(0.913±0.065)、重癥肺炎組(1.260±0.023)均高于正常對照組(0.390±0.031)(P﹤0.01),以重癥肺炎組最高(P﹤0.01),各組間有顯著性差異(P﹤0.01)。<

7、br>　　7.相關(guān)性分析：(1)人外周血淋巴細胞ROS平均熒光強度與彗星平均拖尾長度呈顯著正相關(guān)(r=O.878,P<0.01,n=24);(2)人外周血淋巴細胞ROS平均熒光強度與人外周血血清SOD平均光密度值呈顯著負相關(guān)(r=-O.847,P<0.01,n=24)；(3)人外周血淋巴細胞 ROS平均光密度值與彗星平均拖尾長度呈顯著正相關(guān)(r=O.815,P<0.01,n=24)；(4)人外周血淋巴細胞ROS平均光密度值與人外周血血清