混合皮膚移植中自體角朊細胞表達B7-H1分子在誘導免疫耐受中的作用.pdf

1、目的：探討自體角朊細胞在自體皮島抑制效應中的作用及其機制。 方法： 1.分離外周血淋巴細胞和表皮細胞，建立MELR試驗體系，通過引入附加的自體表皮細胞(并以等量的異體表皮細胞為對照)，在體外模擬自體皮島效應。 2.分析加入和不加入自體角朊細胞的MELR體系中，IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10等幾種細胞因子分泌的動力學曲線。根據(jù)以上動力學曲線，在加入和不加入自體角朊細胞的MELR體系中，引入相應的中和性抗

2、體，觀察反應格局的變化。 3.通過IL-10基因敲除小鼠實驗，來觀察IL-10在誘導免疫抑制中T細胞和角朊細胞各自的重要作用。 4.對角朊細胞進行B7-1的轉(zhuǎn)染，以及負性調(diào)節(jié)分子CTLA-4的阻斷實驗，分析這些經(jīng)典的共刺激分子與角朊細胞誘導抑制的關(guān)系。 5.觀察MELR體系中角朊細胞B7-H1的表達情況，并通過B7-H1單抗的阻斷實驗，來探討這一新發(fā)現(xiàn)的B7分子在自體皮島抑制效應中的作用。 結(jié)果：

3、 1.在La+Eb+Kcb的實驗組中，8小時開始出現(xiàn)IL-2，并逐漸增高，16小時開始有IFN-γ的出現(xiàn)，也逐漸增高。但始終沒有檢測到IL-4和IL-10的存在。在La+Eb+Kca的實驗組中，起初的一段時間里，也出現(xiàn)了較低濃度的IL-2和IFN-γ，到了32小時后開始下降并消失。以此同時開始出現(xiàn)IL-10和IL-4，并開始持續(xù)增高，特別是IL-10在48小時升高尤為明顯。單獨加入抗IL-10時，在32小時以前，可明顯緩解抑制，這可能與

4、系統(tǒng)早期只出現(xiàn)IL-10有關(guān)。而在32小時以后或單獨加入抗IL-4時，都沒有很大的緩解作用。 2.在同種異體增殖抑制作用中起主要作用的是淋巴細胞來源的IL-10而并非角朊細胞分泌的IL-10，但后者有部分協(xié)同作用。 3.自體角朊細胞在轉(zhuǎn)染B7-1基因后，對同種異體增殖反應的抑制誘導能力消失，但加入抗B7-1單抗阻斷B7-1的作用后，其誘導抑制的能力又恢復。而CTLA-4在自體角朊細胞誘導的抑制中并不發(fā)揮相關(guān)作用。

5、 4.B7-H1在MELR的體系中4小時開始有微弱的表達，而8小時之后，就有較強的表達；加入B7-H1單抗或PD-1單抗來阻斷實驗后，自體角朊細胞的抑制作用緩解或消失。 結(jié)論： 1.自體角朊細胞是通過激活T細胞分泌IL-10激活Th2亞群而抑制Th1亞群來誘發(fā)局部免疫抑制。 2.自體角朊細胞通過B7-1、B7-2以外的其他分子提供共刺激信號，而且其負向調(diào)節(jié)作用與CTLA-4無關(guān)。 3.自體角朊細胞是通過B