養(yǎng)血潤(rùn)腸方治療血虛型慢性功能性便秘的臨床及實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中醫(yī)藥的辨證論治為近年來(lái)臨床上治療慢性功能性便秘的主要方法之一，由于其療效顯著，無(wú)毒、副作用，臨床上被廣泛應(yīng)用。但目前對(duì)這方面的報(bào)道主要集中在臨床療效方面，缺乏作用機(jī)理的客觀化研究，影響其進(jìn)一步推廣。因此，導(dǎo)師李國(guó)棟教授在查閱相關(guān)中醫(yī)古籍、現(xiàn)在中醫(yī)文獻(xiàn)、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)便秘機(jī)制研究相關(guān)文獻(xiàn)及結(jié)合多年的臨床經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上組方成養(yǎng)血潤(rùn)腸方治療血虛型慢性功能性便秘。本課題分別從臨床及實(shí)驗(yàn)研究?jī)煞矫鎭?lái)研究其臨床療效及其作用機(jī)制，為其進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供客

2、觀的理論依據(jù)。論文分為三個(gè)部分： 第一部分：文獻(xiàn)綜述1.對(duì)傳統(tǒng)中醫(yī)關(guān)于便秘病名、便秘的病因病機(jī)及便秘的治療原則、應(yīng)用方藥等方面的論述做了系統(tǒng)總結(jié)。 2.對(duì)現(xiàn)代中醫(yī)藥治療慢性便秘的新進(jìn)展進(jìn)行綜述，并在綜述的基礎(chǔ)上提出應(yīng)用養(yǎng)血潤(rùn)腸法治療血虛型慢性功能性便秘。 3.系統(tǒng)論述了近年來(lái)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)慢性功能性便秘與腸神經(jīng)遞質(zhì)關(guān)系的研究進(jìn)展，為本課題的實(shí)驗(yàn)研究提供理論依據(jù)。 第二部分：臨床研究目的：觀察養(yǎng)血潤(rùn)腸方治療血虛

3、型慢性功能性便秘的臨床療效，并與乳果糖口服液作療效對(duì)比觀察。 方法：本臨床研究選擇100例血虛型慢性功能性便秘患者，隨機(jī)分為兩組，即觀察組與對(duì)照組。觀察組51例，對(duì)照組49例。觀察組給予養(yǎng)血潤(rùn)腸方治療，對(duì)照組給予乳果糖口服液治療，療程為兩周。對(duì)治療前、治療第7天及治療后總積分及各癥狀積分情況進(jìn)行對(duì)比分析。 結(jié)果：觀察組治療的痊愈率為33.3﹪，顯效率為47﹪，有效率為13.7﹪，無(wú)效為6﹪，總有效率為94﹪；而對(duì)照組的痊

4、愈率為18.3﹪，顯效率為34.7﹪，有效率為32.7﹪，無(wú)效為14.3﹪，總有效率為85.7﹪。治療組顯愈率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。在改善癥狀總積分方面，觀察組也明顯優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.05)。觀察組在改善血虛癥狀積分上明顯優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.01)；而在改善其它癥狀積分方面，觀察組與對(duì)照組則無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 第三部分：實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)Ⅰ：實(shí)驗(yàn)性小鼠血虛型慢性功能性便秘模型制備的研究目的：根據(jù)文獻(xiàn)綜合方法制備小

5、鼠血虛型慢性功能性便秘模型。 方法：取健康小鼠20只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組小鼠皮下注射鹽酸嗎啡，2.5mg/(kg·d)，共45天，對(duì)照組給予皮下注射等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)組小鼠第1天剪去鼠尾尖端(0.25-0.3cm)，使小鼠失去血液約0.3ml，而后每周同法放血1次，共放血6次，造成血虛模型。這樣就形成了血虛型慢性功能性便秘模型。期間觀察小鼠的一般體征，每天收集兩組小鼠糞便并稱重，第46天，處死小鼠，觀察小鼠結(jié)腸中糞便

6、儲(chǔ)存的情況。 結(jié)果：一般體征觀察：對(duì)照組小鼠：神氣矯健，行動(dòng)敏捷；皮毛光澤而密，緊貼皮膚；眼睛明亮，色澤粉紅；鼻唇清潔，濕潤(rùn)，呈淡粉紅色；腰背平直，食欲正常。實(shí)驗(yàn)組小鼠：放血6次后表現(xiàn)出精神萎靡，倦臥少動(dòng)嗜睡，皮色蒼白或萎黃，毛聳無(wú)華，眼睛淡白無(wú)神；鼻唇淡白失澤；耳朵蒼白而涼；團(tuán)縮拱背，明顯消瘦，食欲不振，活動(dòng)減少等一系列符合中醫(yī)血虛證候的現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)組每天糞便重量(17.20±3.04g/d)與對(duì)照組(22.16±1.78g/d

7、)相比有顯著性差異(P＜0.01)。肉眼觀察：實(shí)驗(yàn)組小鼠結(jié)腸均充滿糞便，糞便成米粒狀，質(zhì)較硬結(jié)；對(duì)照組小鼠結(jié)腸上間斷有呈米粒狀糞便，質(zhì)較軟。血虛型慢性功能性便秘模型造模成功。 實(shí)驗(yàn)Ⅱ：養(yǎng)血潤(rùn)腸方對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠血虛型慢性功能性便秘結(jié)腸組織勻漿及血清中MDA、SOD的影響 目的：研究養(yǎng)血潤(rùn)腸方對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠血虛型慢性功能性便秘結(jié)腸組織勻漿及血清中MDA、SOD的影響。 方法：取健康小鼠72只，隨機(jī)分為6組，即：正常對(duì)照組

8、(A)、模型組(B)、乳果糖組(C)、養(yǎng)血潤(rùn)腸方小劑量組(D)、養(yǎng)血潤(rùn)腸方中劑量組(E)、養(yǎng)血潤(rùn)腸方大劑量組(F)。B、C、D、E、F組按照實(shí)驗(yàn)Ⅰ方法造模。造摸成功后第一天開(kāi)始按動(dòng)物體表面積換算法，給予相應(yīng)的劑量灌服相應(yīng)藥物：C組(乳果糖口服液6.2ml/kg/d)、D組(養(yǎng)血潤(rùn)腸方17g/kg/d)、E組(養(yǎng)血潤(rùn)腸方34g/kg/d)、F組(養(yǎng)血潤(rùn)腸方68g/kg/d)。連續(xù)給藥14天后處死動(dòng)物，檢測(cè)各組小鼠結(jié)腸勻漿及血清中MDA、S

9、OD的含量。 結(jié)果：(一)：結(jié)腸勻漿及血清中MDA含量比較：模型組與空白組比較P＜0.05，說(shuō)明便秘模型小鼠結(jié)腸勻漿及血清中MDA含量明顯增加；養(yǎng)血潤(rùn)腸方各劑量組與模型組比較P＜0.05，而乳果糖組與模型組比較P＞0.05，說(shuō)明養(yǎng)血潤(rùn)腸方各劑量組可降低便秘小鼠結(jié)腸勻漿及血清中MDA含量，而乳果糖則沒(méi)有降低小鼠結(jié)腸勻漿及血清中MDA含量的作用；血清中MDA含量比較，養(yǎng)血潤(rùn)腸方大劑量組與小劑量組比較P＜0.01，說(shuō)明大劑量組降低血清

10、中MDA含量的效果優(yōu)于小劑量組。而其余組養(yǎng)血潤(rùn)腸方結(jié)腸勻漿及血清中MDA含量之間相互比較P＞0.05，說(shuō)明其余組養(yǎng)血潤(rùn)腸方對(duì)結(jié)腸勻漿及血清中MDA含量的降低作用無(wú)顯著性差異。 (二)結(jié)腸勻漿及血清中SOD含量比較：模型組與空白組比較P＜0.05，說(shuō)明便秘模型小鼠結(jié)腸勻漿及血清中SOD明顯減少；養(yǎng)血潤(rùn)腸方各劑量組與模型組比較P＜0.05，而乳果糖組與模型組比較P＞0.05，說(shuō)明養(yǎng)血潤(rùn)腸方各劑量組可增加便秘小鼠結(jié)腸勻漿及血清中SOD

11、含量，而乳果糖則沒(méi)有增加小鼠結(jié)腸勻漿及血清中SOD的作用。大劑量組結(jié)腸勻漿中SOD含量與中劑量組比較P＜0.05，說(shuō)明大劑量組增加結(jié)腸勻漿SOD的作用優(yōu)于中劑量組。而其余組養(yǎng)血潤(rùn)腸方結(jié)腸勻漿血清中SOD含量之間相互比較P＞0.05，說(shuō)明其余組養(yǎng)血潤(rùn)腸方對(duì)結(jié)腸勻漿血清中SOD含量的降低作用無(wú)明顯的差別。 實(shí)驗(yàn)Ⅲ：養(yǎng)血潤(rùn)腸方對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠血虛型慢性功能性便秘結(jié)腸組織勻漿及血清中NO的影響 目的：研究養(yǎng)血潤(rùn)腸方對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠血虛型

12、慢性功能性便秘結(jié)腸組織勻漿及血清中NO的影響。 方法：同實(shí)驗(yàn)Ⅱ，各組動(dòng)物灌服藥物14天后，處死，檢測(cè)大鼠結(jié)腸勻漿及血清中NO的含量。 結(jié)果：(一)結(jié)腸勻漿NO含量：模型組與空白組比較P＜0.01，說(shuō)明便秘模型小鼠結(jié)腸勻漿中NO含量明顯增加；養(yǎng)血潤(rùn)腸方各劑量組與模型組比較P＜0.01，而乳果糖組與模型組比較P＞0.05，說(shuō)明養(yǎng)血潤(rùn)腸方各劑量組均可降低便秘小鼠結(jié)腸勻漿中NO含量，而乳果糖則沒(méi)有降低小鼠結(jié)腸勻漿中NO含量的作用

13、；養(yǎng)血潤(rùn)腸方大劑量組與小劑量組比較P＜0.05，說(shuō)明大劑量組對(duì)降低結(jié)腸勻漿中NO的作用明顯優(yōu)于小劑量組。 (二)血清NO：模型組與空白組比較P＜0.01，說(shuō)明便秘模型小鼠結(jié)腸血清中NO明顯增加；養(yǎng)血潤(rùn)腸方各劑量組與模型組比較P＜0.01，乳果糖組與模型組比較P＜0.05，說(shuō)明養(yǎng)血潤(rùn)腸方各劑量組與乳果糖均可降低便秘小鼠血清中NO含量；養(yǎng)血潤(rùn)腸方大劑量組與乳果糖組比較P＜0.05，而養(yǎng)血潤(rùn)腸方中、小劑量組與乳果糖組比較P＞0.05，

14、說(shuō)明養(yǎng)血潤(rùn)腸方大劑量組降低便秘模型血清中NO效果明顯優(yōu)于乳果糖組，但乳果糖組與養(yǎng)血潤(rùn)腸方中、小劑量組在降低血清中NO的作用上沒(méi)有顯著性差異。 實(shí)驗(yàn)Ⅳ：養(yǎng)血潤(rùn)腸方對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠血虛型慢性功能性便秘結(jié)腸肌間神經(jīng)叢的影響 目的：研究養(yǎng)血潤(rùn)腸方對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠血虛型慢性功能性便秘結(jié)腸肌間神經(jīng)叢的影響。 方法：同實(shí)驗(yàn)Ⅱ，各組動(dòng)物灌服藥物14天后，處死動(dòng)物，打開(kāi)腹腔，分離大腸，切取結(jié)腸段組織約2cm，10﹪甲醛固定，行HE染色及免

15、疫組化染色。 結(jié)果：(一)HE染色：與對(duì)照組比較，見(jiàn)模型組結(jié)腸肌間神經(jīng)叢神經(jīng)元變性、體積減少；粘膜下肌層部分增厚，膠原纖維化。而治療各組結(jié)腸肌間神經(jīng)叢神經(jīng)元大小則有不同程度增加。 (二)免疫組化染色：顯示肌間神經(jīng)叢各神經(jīng)遞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)的神經(jīng)細(xì)胞呈棕黃色。細(xì)胞胞漿呈顆粒狀。模型組各神經(jīng)遞質(zhì)的陽(yáng)性表達(dá)的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較正常組明顯減少，而治療各組則有不同程度的增加.結(jié)果分析：①半定量分析：便秘模型小鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢中5-HT陽(yáng)性細(xì)

16、胞、AchE陽(yáng)性細(xì)胞、VIP陽(yáng)性細(xì)胞及SP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與空白對(duì)照組比較(P＜0.05)均有顯著性差異；養(yǎng)血潤(rùn)腸方各組與模型組及乳果糖組比較(P＜0.05)均有顯著性差異，而乳果糖組與模型組比較(P＞0.05)均無(wú)顯著性差異，說(shuō)明模型組小鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢5-HT陽(yáng)性細(xì)胞、AchE陽(yáng)性細(xì)胞、VIP陽(yáng)性細(xì)胞及SP陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少，養(yǎng)血潤(rùn)腸方各組能增加便秘小鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢5-HT陽(yáng)性細(xì)胞、AchE陽(yáng)性細(xì)胞、VIP陽(yáng)性細(xì)胞及SP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，而

17、乳果糖則沒(méi)有增加便秘小鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢5-HT陽(yáng)性細(xì)胞、AchE陽(yáng)性細(xì)胞、VIP陽(yáng)性細(xì)胞及SP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量的作用。②圖像分析：便秘模型小鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢5-HT陽(yáng)性細(xì)胞、AchE陽(yáng)性細(xì)胞、VIP陽(yáng)性細(xì)胞及SP陽(yáng)性細(xì)胞面密度與空白對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)；養(yǎng)血潤(rùn)腸方各組與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05)，而乳果糖組與模型組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，說(shuō)明模型組小鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢5-HT陽(yáng)性細(xì)胞、AchE陽(yáng)性