茯苓中三萜的分離純化及含量測定研究.pdf

1、茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.) Wolf的干燥菌核，作為利水滲濕、寧心安神的藥物在中國已有兩千多年的藥用歷史。茯苓多糖與三萜類化合物是其主要的化學成分，據(jù)文獻報道，三萜類化合物具有明顯的止嘔、抗炎、抗癌及調(diào)節(jié)免疫功能的作用。迄今為止，《中國藥典》尚無對茯苓含量測定項的要求，因此，建立一種快速、靈敏、準確的方法來測定茯苓藥材中的三萜類成分顯得尤為重要。本課題從茯苓皮中用甲醇提取出三萜類化學成分，再經(jīng)過分離、純化

2、和鑒定，最終得到七個單體化合物，并以這七個單體作為對照品，對茯苓中的三萜類成分進行定性定量分析。
　　茯苓皮經(jīng)甲醇回流提取，將甲醇提取液蒸干濃縮后得到浸膏，加入適量的水混懸，并用乙醚進行萃取。將飽和的NaHCO3水溶液加入乙醚層進行萃取，再用5％的NaOH水溶液萃取，然后將兩部分的萃取物分別用6mol/L HCl酸化，再用乙醚萃取后，即得到Ⅰ（飽和NaHCO3層）和Ⅱ（5％的NaOH層）兩個部位。
　　利用各種分析方法，如硅

3、膠柱色譜法、制備薄層色譜法、制備高效液相色譜法對（飽和的NaHCO3層）部位中的三萜類成分進行分離純化，最終得到5個單體化合物。并用HPLC-MS，1H-NMR和13C-NMR技術(shù)對所得的單體化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果為:茯苓酸A、茯苓酸AM、豬苓酸C、去氫依布里酸、3-氫化去氫松苓酸。最后用HPLC-DAD法對所得單體化合物進行純度測定。
　　在本課題中，利用液質(zhì)聯(lián)用色譜法(HPLC/MS/MS)建立了一種靈敏度高、準確性好的方法

4、同時對茯苓中7種三萜酸類成分進行定性定量分析。樣品先在高效液相色譜儀中得到有效的分離，色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18，流動相為乙腈-0.1％甲酸，流速設(shè)定為0.3ml/min。利用膽酸作為內(nèi)標，MRM對分析物進行定性定量分析。7種三萜酸的線性范圍結(jié)果如下所述，去氫土莫酸:0.25-4.93μ g/mL;茯苓酸:0.31-6.20μ g/mL;茯苓酸A:0.44-8.89μg/mL;茯苓酸B:0.20-4.01μg/mL

5、;豬苓酸C:0.28-5.68μg/mL;去氫依布里酸:0.36-7.18μg/mL;3-氫化去氫松苓酸:0.38-7.66μg/ml（相關(guān)系數(shù)＞0.99）。所有分析物的日內(nèi)及日間精密度的相對標準偏差(RSD)均在10％以內(nèi)，穩(wěn)定性實驗的結(jié)果的相對標準偏差(RSD)也都在10％以內(nèi)，回收率的結(jié)果均在90％-110％之間。此外，將該方法運用于不同產(chǎn)地茯苓樣品（11批茯苓塊和12批茯苓皮）的含量測定，評價了不同產(chǎn)地不同藥用部位的茯苓藥材質(zhì)量