馬鹿茸血酶解制備抗疲勞活性肽的研究.pdf

1、本文以天山馬鹿茸血為原料，通過(guò)兩種蛋白酶水解，制備抗疲勞肽；并通過(guò)小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)研究產(chǎn)物肽的抗疲勞和抗氧化活性；在此基礎(chǔ)上，采用反相高效液相色譜測(cè)定抗疲勞活性高的產(chǎn)物肽相對(duì)分子質(zhì)量分布，用SephadexG-15將此水解產(chǎn)物進(jìn)行分離；進(jìn)一步對(duì)分離組分進(jìn)行抗疲勞和抗氧化活性鑒定，并探討其抗疲勞機(jī)制。 首先對(duì)鹿茸血進(jìn)行酶解。通過(guò)比較木瓜和中性蛋白酶水解產(chǎn)物的水解度和體外抗氧化效果，確定木瓜蛋白酶對(duì)鹿茸血蛋白進(jìn)行水解，并確定的最佳水

2、解條件為：溫度52℃；pH為7.4；E/S為12677U/g底物；[S]為8％，水解度最高為19.8％。 選取三種不同水解度的水解產(chǎn)物以及原鹿茸血和鹿茸粉，以150mg/kg·d灌胃15天，進(jìn)行小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明：水解度(DH)為19.8％的水解產(chǎn)物(命名為肽1)使小鼠的游泳時(shí)間為250min，與空白對(duì)照組相比，游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)。在相同的游泳時(shí)間內(nèi)，肽1組肌乳酸含量比對(duì)照組減少44.9％，肝糖元的消耗量減少38.4％，血

3、液中尿素氮含量減少了31.4％。而且與對(duì)照組相比，肽1組顯著增強(qiáng)小鼠血清、肝組織的總抗氧化能力和GSH-pX的活力，減少了MDA的含量，具有明顯的抗氧化活性。與鹿茸粉和原鹿茸血粉相比，肽1組的抗疲勞和抗氧化性明顯增強(qiáng)。最終選取抗疲勞活性和抗氧化活性最好的肽1進(jìn)行下一步試驗(yàn)。 選用SephadexG-15(1.8×60cm)柱對(duì)水解產(chǎn)物肽1進(jìn)行分離，最終確定的分離條件。用凝膠高效液相色譜(HPLC)測(cè)定肽1的相對(duì)分子質(zhì)量分布為27