RASSF7在自體移植靜脈組織中表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　作為當(dāng)代全球致死致殘性疾病的主要組成部分，動(dòng)脈硬化閉塞性疾病(Arteriosclerotic disease，AD)在我國(guó)的發(fā)病呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。旁路移植術(shù)是治療冠狀動(dòng)脈及下肢動(dòng)脈等周?chē)鷦?dòng)脈缺血性疾病的有效方法，但術(shù)后血管再狹窄嚴(yán)重影響了遠(yuǎn)期療效，高達(dá)40％患者發(fā)生遠(yuǎn)期靜脈血管再狹窄導(dǎo)致的狹窄。移植靜脈血管再狹窄是一個(gè)多因素的過(guò)程，目前病因仍不清，血管平滑肌細(xì)胞（Vascular smooth muscle cel

2、l，VSMC）的增殖和遷移是其中重要的病理變化，和大多數(shù)細(xì)胞相似，它的增殖也受控于細(xì)胞周期調(diào)控蛋白。RASSF7基因是RAS原癌基因的效應(yīng)蛋白R(shí)ASSF家族中的成員，它于動(dòng)物中廣泛存在，并且在胚胎的發(fā)育及細(xì)胞周期調(diào)控和增殖、凋亡中有重要作用。本文分別在基因和蛋白水平檢測(cè)了RASSF7在自體移植靜脈中隨時(shí)間的變化情況，并檢測(cè)細(xì)胞增殖指標(biāo)PCNA蛋白水平表達(dá)的變化，探討RASSF7與血管組織中VSMC增殖及移植血管再狹窄的發(fā)生之間是否存在關(guān)

3、系。
　　方法：
　　使用SD大鼠制作頸總靜脈-腎下腹主動(dòng)脈移植模型60只，正常飼養(yǎng)至術(shù)后7天、14天和28天時(shí)間點(diǎn)各20只處死，取移植后的靜脈及對(duì)側(cè)正常頸總靜脈作為對(duì)照。HE染色觀察形態(tài)變化，Real-Time PCR檢測(cè)RASSF7在基因水平的變化，免疫組化染色與Western-blot蛋白印跡檢測(cè)RASSF7在蛋白水平的表達(dá)變化趨勢(shì)，Western-blot檢測(cè)PCNA在蛋白水平表達(dá)及PCNA與RASSF7表達(dá)間關(guān)系。

4、
　　結(jié)果：
　　1、組織學(xué)檢查結(jié)果
　　HE染色結(jié)果可見(jiàn):正常靜脈的內(nèi)膜僅由一層內(nèi)皮細(xì)胞組成，而中膜為2至3層血管平滑肌細(xì)胞;在血管移植術(shù)后的靜脈隨時(shí)間延長(zhǎng)，內(nèi)膜和中膜的結(jié)構(gòu)逐漸增厚，在14-28天時(shí)達(dá)到高峰。免疫組織化學(xué)染色可見(jiàn):正常靜脈中RASSF7陽(yáng)性細(xì)胞很少，在移植術(shù)后7天靜脈內(nèi)開(kāi)始有表達(dá)，14天時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞大量出現(xiàn)，28天達(dá)到高峰。正常靜脈及術(shù)后7、14、28天的RASSF7陽(yáng)性細(xì)胞率分別為(4.7±1.23

5、)％、(19.6±1.67)％、(46.4±1.54)％、(58.5±2.87)％。術(shù)后7、14、28天與正常靜脈陽(yáng)性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、Western-blot檢測(cè)結(jié)果
　　正常靜脈中RASSF7蛋白的表達(dá)量很少，術(shù)后移植血管中RASSF7蛋白的表達(dá)增多并呈逐漸表達(dá)逐漸增加的趨勢(shì)，符合組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果。正常靜脈，術(shù)后7、14、28天的蛋白光密度值為0.254±0.017、0.425±0.021、0

6、.528±0.023、0.679±0.019，PCNA的光密度值分別為0.156±0.012、0.228±0.015、0.371±0.011、0.404±0.013，相關(guān)性分析結(jié)果顯示RASSF7蛋白與PCNA蛋白的表達(dá)隨時(shí)間變化成正相關(guān)(r=0.9173，P＜0.01)。
　　3、Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果
　　Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn):正常靜脈中RASSF7 mRNA表達(dá)量很少，術(shù)后7天、14天、2