肺癌患者BALF中巨噬細(xì)胞和血管生成因子檢測及意義.pdf

1、肺癌是目前人類最常見的惡性腫瘤之一,具有較高的發(fā)病率和死亡率。局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是肺癌患者死亡的主要原因,而這一過程常常依賴于一些促血管生成因子,如血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和白細(xì)胞介素8(interleukin8,IL-8)。已有研究表明腫瘤細(xì)胞及腫瘤組織實質(zhì)和間質(zhì)浸潤的炎細(xì)胞均可產(chǎn)生這些因子。事實上,浸潤炎細(xì)胞和促血管生成因子在肺癌腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用,然而肺

2、癌患者支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中細(xì)胞類型與數(shù)量、促血管生成因子尤其是其中巨噬細(xì)胞的免疫表型目前尚不清楚。本研究中我們收集了54例吸煙肺癌患者,包括36例鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)、9例腺癌(adenocarcinoma, AC)和9例小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC);13例非吸煙非特異性慢性炎

3、、7例吸煙非特異性慢性炎和8例非吸煙正常者的支氣管肺泡灌洗液,并對浸潤炎細(xì)胞的比例、巨噬細(xì)胞的免疫表型以及IL-8和VEGF表達(dá)水平進(jìn)行了檢測,分析了其臨床意義,獲得如下主要研究結(jié)果及結(jié)論:
　　1.肺癌患者BALF中浸潤巨噬細(xì)胞優(yōu)勢表型為CD163+巨噬細(xì)胞。
　　(1)我們共收集54例吸煙肺癌患者,包括36例鱗狀細(xì)胞癌、9例腺癌和9例小細(xì)胞肺癌;13例非吸煙非特異性慢性炎、7例吸煙非特異性慢性炎和8例非吸煙正常者的BAL

4、F樣本,均來自于第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院,并通過倫理論證以及簽署知情同意書。
　　(2)我們應(yīng)用液基薄層細(xì)胞學(xué)涂片 HE染色分析 BALF中細(xì)胞類型、數(shù)量及炎細(xì)胞比例情況。研究發(fā)現(xiàn)與正常對照相比,肺癌及非特異性慢性炎患者BALF中巨噬細(xì)胞占總炎細(xì)胞比例明顯下降,而中性粒細(xì)胞所占比例明顯升高(P<0.01)。其次,與非吸煙非特異性慢性炎相比,肺癌患者 BALF中巨噬細(xì)胞所占比例明顯下降(P<0.05),而中性粒細(xì)胞所占比例明顯升高(P<

5、0.05)。肺腺癌患者BALF中有較多淋巴細(xì)胞浸潤,而肺鱗狀細(xì)胞癌患者BALF中腫瘤細(xì)胞明顯多于腺癌及小細(xì)胞肺癌。
　　(3)進(jìn)一步應(yīng)用液基薄層細(xì)胞學(xué)涂片ICC染色CD68和CD163單克隆抗體鑒定分析BALF中巨噬細(xì)胞的免疫表型。研究發(fā)現(xiàn)HE染色中通過病理形態(tài)學(xué)證實的巨噬細(xì)胞均表達(dá)CD68,而其中接近一半的浸潤巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)CD163陽性(37.4％±28.1%)。其次肺癌組和對照組BALF中巨噬細(xì)胞陽性率分別為81%和70%;而

6、小細(xì)胞肺癌患者BALF中CD163+的巨噬細(xì)胞比例明顯增高。
　　2.BALF中促血管生成因子表達(dá)水平檢測分析。
　　(1)我們應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測 BALF樣本中促血管生成因子IL-8和VEGF的表達(dá)水平,研究發(fā)現(xiàn)與正常對照組(0.8±0.7 ng/ml, p<0.05)和非吸煙非特異性炎癥組(1.5±1.6 ng/ml, p<0.05)相比,肺癌組(5.0±5.3 ng/ml) IL-8水平明顯增高。其次,肺癌組I

7、L-8水平與總蛋白相對比值仍明顯增高[(9.1±8.9)×10-6 vs.(1.7±1.1)×10-6 and(4.2±4.0)×10-6, both p<0.05]。
　　(2)肺癌組VEGF水平無論是絕對濃度還是相對比值均高于正常對照組[(0.4±0.3 ng/ml vs.0.2±0.1 ng/ml and(8.3±4.2)×10-7 vs.(4.9±2.3)×10-7, respectively, both p<0.05]。

8、
　　(3)我們還發(fā)現(xiàn)肺鱗狀細(xì)胞癌與腺癌患者BALF中IL-8表達(dá)水平存在明顯差異,而其余不同組織學(xué)類型肺癌之間以及肺癌組與對照組之間兩者表達(dá)水平均無明顯差異。
　　3.BALF中促血管生成因子表達(dá)水平與不同類型細(xì)胞的相關(guān)性分析。
　　(1)研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌患者BALF中IL-8表達(dá)水平與浸潤中性粒細(xì)胞數(shù)目呈明顯的正相關(guān)性(p<0.01),而肺腺癌患者BALF中IL-8表達(dá)水平與浸潤淋巴細(xì)胞數(shù)目呈明顯的正相關(guān)性(p

9、<0.05)。
　　(2)我們還發(fā)現(xiàn)肺鱗狀細(xì)胞癌患者BALF中VEGF表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞數(shù)目呈明顯的正相關(guān)性(p<0.05),并通過肺癌組織IHC染色進(jìn)一步證實腫瘤細(xì)胞表達(dá)VEGF。
　　(3)我們并未發(fā)現(xiàn)IL-8和VEGF表達(dá)水平與浸潤巨噬細(xì)胞或CD163+M2型巨噬細(xì)胞比例具有明顯的相關(guān)性。
　　綜上結(jié)果可見,肺癌患者BALF中浸潤炎細(xì)胞及促血管生成因子水平可以反映肺癌微環(huán)境狀態(tài),其檢測分析有助于肺癌早期臨床診斷。