轉(zhuǎn)染GFP人羊膜上皮細胞側(cè)腦室移植治療偏側(cè)帕金森病大鼠模型的實驗研究.pdf

1、目的： (1)觀察人羊膜上皮細胞正常大鼠側(cè)腦室移植后的存活情況； (2)觀察人羊膜上皮細胞帕金森病(PD)大鼠模型側(cè)腦室移植后的存活及分化情況，以及它對阿樸嗎啡引起的PD大鼠旋轉(zhuǎn)行為、黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元、紋狀體區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響。 方法： (1)細胞移植兩周后免疫組織化學法檢測人羊膜上皮細胞Oct-4和Nanog的表達情況； (2)采用6-羥多巴立體定向紋狀體內(nèi)注射制作偏側(cè)PD大鼠模型，將制

2、模成功大鼠隨機分成兩組：人羊膜上皮細胞(HAECs)組、NS組，另取正常大鼠作正常對照組。HAECs組側(cè)腦室注射轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)的人羊膜上皮細胞，NS組側(cè)腦室注射NS，正常對照組不做任何處理。1周后腹腔注射阿樸嗎啡觀察HAECs組和NS組大鼠旋轉(zhuǎn)行為的變化，連續(xù)觀察10周；在細胞移植后的第1、4、7、10周分別記錄HAECs組和NS組大鼠體重；HAECs組大鼠細胞移植5周后免疫熒光電鏡觀察人羊膜上皮細胞GFP的表達情況；10周

3、后TH染色觀察HAECs組、NS組和正常對照組大鼠黑質(zhì)區(qū)TH陽性神經(jīng)元的變化情況以及側(cè)腦室內(nèi)人羊膜上皮細胞的分化情況；高效液相色譜法(HPLC)測定HAECs組、NS組和正常對照組大鼠紋狀體多巴胺(DA)及其代謝產(chǎn)物3，4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)以及腦脊液中多巴胺的水平。 結(jié)果： (1)人羊膜上皮細胞正常大鼠側(cè)腦室移植二周后表達Oct-4和Nanog； (2)從移植后第二周開始，HAECs

4、組PD大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)較NS組明顯降低(均P<0.01)；細胞移植后的第1、4、7、10周HAECs組和NS組大鼠體重無明顯差異(均P>0.05)；細胞移植后5周，可見側(cè)腦室內(nèi)人羊膜上皮細胞表達GFP； HAECs組黑質(zhì)區(qū)TH陽性神經(jīng)元數(shù)量較NS組升高(P<0.01)，HAECs組、NS組黑質(zhì)區(qū)TH陽性神經(jīng)元數(shù)比正常對照組低(P<0.01)； HAECs組大鼠紋狀體區(qū)DA及其代謝產(chǎn)物DOPAC含量較NS組明顯升高(P<0.05)，HVA也較

5、NS組顯著升高(P<0.01)，HAECs組腦脊液中DA含量較NS組顯著升高(P<0.01)，HAECs組、NS組紋狀體DA、DOPAC、HVA及腦脊液中DA含量比正常對照組低(P<0.05)。 結(jié)論： (1)人羊膜上皮細胞正常大鼠側(cè)腦室移植二周后可以存活并保持干細胞性質(zhì)； (2)人羊膜上皮細胞PD大鼠側(cè)腦室移植可以改善PD大鼠的癥狀，其機制可能與人羊膜上皮細胞釋放的神經(jīng)營養(yǎng)因子減少了6-OHDA對黑質(zhì)區(qū)DA能神