抗磺胺嘧啶及磺胺類藥母核結(jié)構(gòu)單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、為了實(shí)現(xiàn)對(duì)磺胺類藥(SAs)多殘留和磺胺嘧啶(SD)單殘留的免疫分析，本研究先后制備了抗磺胺類藥母核結(jié)構(gòu)(對(duì)氨基苯磺酰胺)和抗磺胺嘧啶的兩種單克隆抗體，研究結(jié)果如下： 1、用化學(xué)方法合成了半抗原N-磺胺-4-氨基苯甲酸(SDL)，該半抗原包含磺胺類藥的母核結(jié)構(gòu)且以苯環(huán)為連接臂。采用混合酸酐法將SDL與人血清白蛋白(HSA)連接制備了免疫抗原SDL-HSA，用同樣的方法將其與卵清白蛋白(OVA)連接制備了包被抗原SDL-OVA。用

2、SDL-HSA免疫BALB/c小鼠，經(jīng)融合篩選制備了7株單抗，其中SDL-4株腹水產(chǎn)量最高，且其效價(jià)在1：1.28×106以上。經(jīng)單抗分型試劑盒鑒定，其亞型為IgG2b。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)結(jié)果表明，其對(duì)多種商品化的磺胺藥均有較強(qiáng)的識(shí)別能力，針對(duì)磺胺間甲氧嘧啶(SMM)、磺胺對(duì)甲氧嘧啶(SMD)、SD、磺胺喹惡啉(SQX)及磺胺二甲嘧啶(SM2)的50％抑制率(IC50)分別為：251.3、374.9、117.5、19.5和233.1

3、ng/mL。以上結(jié)果表明該單抗可用于SAs多殘留的免疫分析。 2、用重氮化-偶聯(lián)法將SD與HSA連接制備了免疫抗原SD-HSA，用同樣的方法將其與OVA連接制備了包被抗原SD-OVA，用過碘酸鈉法將SD-OVA與辣根過氧化物酶(HRP)連接制備了酶標(biāo)抗原(SD-OVA-HRP)。用SD-HSA免疫BALB/c小鼠，經(jīng)融合、篩選和克隆制備了4株單抗，其中SD-4株腹水產(chǎn)量最高，且其效價(jià)在1：1.28×106以上。經(jīng)單抗分型試劑盒鑒