虛寒證的證候規(guī)律及其代謝組學(xué)的研究.pdf

1、目的： 1.通過文獻(xiàn)研究，總結(jié)古今醫(yī)家對虛寒證病因、證型及癥狀認(rèn)識，分析虛寒證證本質(zhì)研究情況，從而揭示虛寒證的病因、證型、癥狀的分布規(guī)律及證本質(zhì)的研究現(xiàn)狀；同時結(jié)合專家意見，制定具有普適性的虛寒證臨床流行病學(xué)調(diào)查問卷，并為虛寒證的病因和證候規(guī)律研究提供理論和文獻(xiàn)基礎(chǔ)。 2.通過臨床流行病學(xué)調(diào)查，統(tǒng)計(jì)虛寒證的患病率，分析病因、證型、癥狀特點(diǎn)和規(guī)律，籍此了解虛寒證的患病情況，尋找虛寒證的主要危險因素，探討虛寒證證型的分布情況

2、及各證型的主要辨證指標(biāo)。并為中醫(yī)證候開展大樣本的臨床流行病學(xué)研究的技術(shù)操作方法提供一個范例。 3.利用核磁共振技術(shù)，探討虛寒證機(jī)體代謝產(chǎn)物的變化，闡釋虛寒證的生物學(xué)本質(zhì)，探索代謝組學(xué)技術(shù)在證本質(zhì)研究中的應(yīng)用。 方法： 1.文獻(xiàn)研究 以《中國醫(yī)籍大辭典》為檢索工具，對河北醫(yī)科大學(xué)西校區(qū)圖書館中現(xiàn)有的從《內(nèi)經(jīng)》到清末200余本古代文獻(xiàn)進(jìn)行整理分析；以中國期刊全文數(shù)據(jù)庫(河北醫(yī)科大學(xué)圖書館CNKI新版檢索頁面)

3、為檢索庫，對1996年至2006年的學(xué)術(shù)期刊中與虛寒證有關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行整理，癥狀進(jìn)行頻數(shù)分析。 2.虛寒證證候規(guī)律的研究 在文獻(xiàn)研究、專家咨詢的基礎(chǔ)上，制定虛寒證調(diào)查問卷，經(jīng)中醫(yī)學(xué)、量表學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、社會學(xué)等專家論證后，進(jìn)行預(yù)調(diào)查，修改后對問卷進(jìn)行信度和效度的評測，形成適合虛寒證證候?qū)W和病因?qū)W調(diào)查的具有量表性質(zhì)的問卷。運(yùn)用此問卷，采用隨機(jī)-整群抽樣方法，選擇經(jīng)培訓(xùn)合格的調(diào)查員對石家莊及其周邊地區(qū)的常住居民2500人進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)

4、查?；厥盏恼{(diào)查問卷經(jīng)專家反復(fù)審查和診斷，對符合要求的問卷進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，運(yùn)用多元統(tǒng)計(jì)分析(聚類分析、因子分析、主成分分析、logistic回歸分析)和中醫(yī)理論知識，對虛寒證的數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類挖掘和醫(yī)理分析。 3.代謝組學(xué)研究 選取典型虛寒證月經(jīng)病患者作為研究對象，以典型虛熱證月經(jīng)病患者和正常健康女性為對照，于每位受試者月經(jīng)期的第二天抽取空腹肘靜脈血5ml，3000r/min離心20min后，取上清液2ml保存于-70℃的低溫保

5、存箱中待測。利用日本電子600兆核磁共振波譜儀對血清進(jìn)行代謝產(chǎn)物檢測。采用dalte軟件(http：//qobrue.usc.es)對研究對象血清的1 HNMR譜按80.04間隔從δ0～6分段進(jìn)行數(shù)據(jù)提取，除去水峰84.67，對余下的各段譜峰進(jìn)行積分。將峰面積的積分?jǐn)?shù)據(jù)歸一化之后，以文獻(xiàn)[2]為參比，由核磁共振圖譜解析專家對每一區(qū)段進(jìn)行代謝產(chǎn)物鑒定，按照峰的位置及其代表物質(zhì)的完整性，經(jīng)整理共得到24個代謝物(其中有2個為未知代謝物)和1

6、個葡萄糖+氨基酸的區(qū)間段，將每一種代謝物的不同區(qū)間段的積分值相加得到25個總積分值。以Excel文件貯存，用于統(tǒng)計(jì)分析。剩下的血清采用放射免疫分析法測定血清卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)、睪酮(T)、孕酮(P)的含量。 結(jié)果： 1.文獻(xiàn)研究 1.1 文獻(xiàn)研究結(jié)果表明，目前對虛寒證病因的認(rèn)識與古代文獻(xiàn)基本一致；虛寒證的辨證無統(tǒng)一規(guī)范，認(rèn)識也尚不統(tǒng)一；虛寒證現(xiàn)有的各種辨證方法對虛寒證的臨床和

7、科研有一定的指導(dǎo)意義，但其多建立在臨床報(bào)道和個人經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上而缺少臨床證候?qū)W的研究；臨床和科研重視證候的本質(zhì)研究而忽視證候本身內(nèi)容的研究。 1.2 經(jīng)對現(xiàn)代文獻(xiàn)中描述的虛寒證癥狀進(jìn)行頻數(shù)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示四肢不溫、畏寒、大便稀溏、倦怠四個癥狀對虛寒證的診斷可能有重要意義。 1.3 文獻(xiàn)研究結(jié)果提示：近十年，虛寒證本質(zhì)的研究由單個指標(biāo)向多個指標(biāo)群的研究方向轉(zhuǎn)變，引入虛寒證本質(zhì)研究的新指標(biāo)極少，缺乏一定的創(chuàng)新性。目前尚無公認(rèn)的虛

8、寒證特異性、敏感性的指標(biāo)。 2.虛寒證證候規(guī)律的研究 2.1 根據(jù)文獻(xiàn)研究、專家意見和預(yù)調(diào)查結(jié)果，研制了《虛寒證證候?qū)W臨床流行病學(xué)調(diào)查問卷》，經(jīng)臨床流行病學(xué)調(diào)查和數(shù)據(jù)分析，結(jié)果表明：該問卷具有較好的信度和效度，具有一定的普適性。 2.2 臨床流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明：虛寒證在人群中的患病率是9.946％。 2.3 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示：虛寒證的發(fā)生與性別、年齡、學(xué)歷、職業(yè)、居住地等人口學(xué)特征有關(guān)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

9、均P<0.01)；虛寒證發(fā)病的最大危險因素為房勞多產(chǎn)，OR=27.926，其余依次是虛寒體質(zhì)、感受寒邪、飲食失宜、情志所傷、過度勞累。 2.4 根據(jù)聚類分析和因子分析的結(jié)果，虛寒證的常見證候是：腎陽虛證(18.828％)、脾腎陽虛證(16.318％)、心腎陽虛證(14.644％)、脾陽虛證(10.044％)、心脾陽虛證(10.044％)、肺腎陽虛證(8.787％)、心陽虛證(6.276％)、肺陽虛證(5.021％)、肝脾陽虛證(

10、4.184％)九個證候群。分析結(jié)果提示：虛寒證主要以兩臟相兼為病多見，占56.904％，以單臟為病次之，占40.167％；其中腎陽虛證在虛寒證中所占比重較大，肝陽虛證多與其它臟相兼出現(xiàn)。 2.5 經(jīng)主成分分析和logistic逐步回歸分析，得出對虛寒證各證型診斷有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的主要癥狀(其中主癥是各證型中的主要辨證指標(biāo)，按OR值由大到小的順序排列)如下： 脾陽虛證：主癥是脘腹脹滿、大便稀溏、倦怠、畏寒；次癥是四肢不溫、食少

11、納呆、神疲、遇冷加重、喜暖喜按、舌淡胖。 肝脾陽虛證：主癥是遇冷加重、食少納呆、兩脅脹滿、惡心、眼花；次癥是畏寒、頭暈、四肢不溫、兩脅隱痛、喜熱飲、喜暖喜按。 心陽虛證：主癥是喜熱飲、心悸、脈虛弱、怔忡；次癥是畏寒、四肢不溫、氣短、自汗、口唇色暗、下肢浮腫、遇冷加重。 肺陽虛證：主癥是易感冒、咳嗽、咳痰色白、遇勞加重；次癥是畏寒、氣短、四肢不溫、脈遲緩無力、舌質(zhì)淡白。 心脾陽虛證：主癥是脈沉遲無力、心悸、

12、大便稀溏、脘腹脹滿、胸憋悶；次癥是畏寒、四肢不溫、喜暖喜按、頭面浮腫、苔薄白。 肺腎陽虛證：主癥是腰膝酸軟、咳嗽、舌質(zhì)淡白、易感冒、尿少；次癥是四肢不溫、畏寒、咳痰色白、神疲、苔白膩。 腎陽虛證：主癥是尿頻、腰膝酸軟、面色白光白、苔白、畏寒；次癥是四肢不溫、遺尿、夜尿多、小便清長、舌淡胖或邊有齒痕、脈細(xì)弱或遲緩無力。 心腎陽虛證：主癥是心悸、尿少、腰膝酸軟、遇冷加重、胸痛；次癥是畏寒、四肢不溫、倦怠、下肢浮腫、尿

13、后余瀝、脈細(xì)弱或沉細(xì)無力。脾腎陽虛證：主癥是大便稀溏、面色白光白、尿頻、腰膝酸軟、胃脘隱痛；次癥是完谷不化、四肢不溫、倦怠、畏寒、喜熱飲、脈沉遲無力。 2.6 綜合研究結(jié)果與專家意見，認(rèn)為畏寒、四肢不溫是虛寒證特征性癥狀。 3.虛寒證機(jī)體的代謝組學(xué)研究 3.1 虛寒證組、虛熱證組和正常組研究對象的血清1HNMR圖譜 3.2 三組血清1HNMR圖譜譜峰面積積分的比較 3.3 虛寒證組、虛熱證組和正常

14、組血清生殖激素水平的變化 3.4 虛寒證的生物標(biāo)志物與生殖激素的相關(guān)性分析 結(jié)論： 本課題采用文獻(xiàn)研究、臨床流行病學(xué)調(diào)查及代謝組學(xué)的方法，對虛寒證展開了初步系統(tǒng)的研究，所得結(jié)論如下： 1.運(yùn)用文獻(xiàn)研究的方法，探討了虛寒證的病因和臨床表現(xiàn)特點(diǎn)，從整體上把握了虛寒證的研究規(guī)律和發(fā)展方向，為下一步的研究奠定理論和文獻(xiàn)基礎(chǔ)。 2.本課題臨床流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)虛寒證的患病率為9.946％：統(tǒng)計(jì)分析表明虛寒證的

15、發(fā)生與性別、年齡、學(xué)歷、職業(yè)、居住地等人口學(xué)特征有關(guān)；房勞多產(chǎn)是虛寒證發(fā)生的主要影響因素，其余依次是虛寒體質(zhì)、感受寒邪、飲食失宜、情志所傷、過度勞累。據(jù)此可以有針對性地預(yù)防虛寒證的發(fā)生。 3.虛寒證以腎陽虛證、脾腎陽虛證、心腎陽虛證、脾陽虛證、心脾陽虛證、肺腎陽虛證、心陽虛證、肺陽虛證、肝脾陽虛證九個證型為常見證型。 4 經(jīng)文獻(xiàn)研究，結(jié)合專家意見以及流調(diào)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析，確定了每種證型的主要辨證指標(biāo)，畏寒、四肢不溫是虛寒證

16、的特征性癥狀，為虛寒證診斷標(biāo)準(zhǔn)的確立提供參考。 5 通過本次臨床流行病學(xué)調(diào)查，獲得了中醫(yī)證候的大樣本臨床流行病學(xué)調(diào)查的方法、質(zhì)量控制及數(shù)據(jù)處理等具體經(jīng)驗(yàn)，對中醫(yī)證候?qū)W研究進(jìn)行了有意義的探索。 6 糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝障礙，導(dǎo)致能量產(chǎn)生不足可能是虛寒證發(fā)生的重要原因。初步研究認(rèn)為虛寒證機(jī)體代謝產(chǎn)物中的乳酸、檸檬酸、琥珀酸、不飽和脂類、VLDL、乙酰乙酸、谷氨酸、1.79ppm處的未知化合物可以作為虛寒證的生物標(biāo)志物，提示這