肺內(nèi)外感染致急性肺損傷病理改變與激素干預(yù)效果差異的研究.pdf

1、目的：急性肺損傷（acute lung injury，ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是機(jī)體在遭受各種侵襲（如創(chuàng)傷、休克、感染、中毒等）后發(fā)生的急性肺間質(zhì)性炎和肺泡.毛細(xì)血管膜損傷，導(dǎo)致通透性肺水腫、肺動(dòng)脈高壓、肺內(nèi)微血栓形成，以進(jìn)行性呼吸困難和難以糾正的低氧血癥為主要表現(xiàn)的臨床綜合征。ARDS是ALI的嚴(yán)重階段，二者具有性質(zhì)相同但程度不同的病理生理改變。<

2、br>　　 ALI/ARDS病因復(fù)雜，按原發(fā)病的不同將其分為肺內(nèi)源性急性肺損傷（ARDSp）和肺外源性急性肺損傷（ARDSexp），其中肺炎是引起ARDSp的最常見(jiàn)原因，敗血癥是引起ARDSexp的最常見(jiàn)原因。兩者肺損傷機(jī)制差異并不明確。糖皮質(zhì)激素（glucocorticoids，GCs）具有強(qiáng)大的抗炎抗免疫作用，可以通過(guò)多種機(jī)制來(lái)抑制炎癥反應(yīng)，改善血管通透性，減輕肺水腫，從而影響ALI的發(fā)生和發(fā)展。GCs用于ALI的治療已有很長(zhǎng)的歷

3、史，但在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)不同病因?qū)е碌腁LI患者對(duì)激素治療的反應(yīng)存在較大差異。
　　 因此，本研究復(fù)制了肺內(nèi)、外感染兩種病因?qū)е碌腁LI/ARDS的動(dòng)物模型，分析比較二者在病理改變、炎性介質(zhì)、激素干預(yù)效果等方面的差異，探討ALI發(fā)病機(jī)制、激素干預(yù)效果與機(jī)理，為臨床個(gè)體化治療肺內(nèi)外感染導(dǎo)致的ARDS提供理論依據(jù)。
　　 方法：健康雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為6組，每組8只動(dòng)物：①正常對(duì)照組（NS組）：尾靜脈注射生理鹽水1ml

4、②肺外感染組（LPS組）：尾靜脈注射LPS（8mg/kg）③肺內(nèi)感染組（E.coli組）：氣管內(nèi)緩慢滴注E.coli混懸液（3ml/kg）④正常對(duì)照+地塞米松組（NS+Dex組）⑤肺外感染組+地塞米松組（LPS+Dex組），⑥肺內(nèi)感染組+地塞米松組（E.coli+Dex組），④、⑤、⑥三組為激素干預(yù)組，造模后立即腹腔注射Dex（2mg/kg）。
　　 E.coli組及E.coli+Dex組模型復(fù)制24小時(shí)后取材，其余各組模型復(fù)制

5、4小時(shí)后取材。將動(dòng)物以10％水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉，固定在手術(shù)臺(tái)上。股動(dòng)脈穿刺采血，收集血液，離心（3000 rpm，4℃，10min），吸取上清，分裝，-80℃保存，用于細(xì)胞因子測(cè)定。開(kāi)胸處死動(dòng)物，暴露肺組織，止血鉗夾閉右主支氣管后，將右肺完整切除，取右肺上葉肺組織用于濕/干重比檢測(cè)，取右肺中葉肺組織用10％中性福爾馬林溶液固定，留做病理及免疫組織化學(xué)檢查，右后葉用4％戊二醛固定，留做透射電鏡檢查。分離出氣管，經(jīng)氣管插管

6、行左肺支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液（BALF），離心（1200 rpm，4℃，10min），細(xì)胞沉淀用于細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)，上清液分裝，-80℃保存，用于蛋白含量及細(xì)胞因子的測(cè)定。
　　 結(jié)果：（1）LPS組和E.coli組光鏡下肺組織病理評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但E.coli組主要表現(xiàn)在肺組織結(jié)構(gòu)的毀損，氣道上皮壞死脫落，而LPS組主要表現(xiàn)為肺泡間隔的增寬和血管充血。LPS+Dex組病理評(píng)分顯著低于LPS組（P<

7、0.01）。電鏡觀察顯示兩模型組均有超微結(jié)構(gòu)的改變，E.coli組重于LPS組，LPS+Dex組超微結(jié)構(gòu)的改變較LPS組明顯減輕，而E.coli+Dex組與E.coli組比較無(wú)明顯差異。（2）E.coli組和LPS組肺W/D、BALF中細(xì)胞總數(shù)及蛋白含量均高于NS組（P<0.01），除肺W/D外，其它兩個(gè)指標(biāo)在兩模型組之間有顯著差異（P>0.01）。這三個(gè)指標(biāo)在LPS+Dex組均明顯下降（P<0.05），而E.coli+Dex組只有BA

8、LF中細(xì)胞總數(shù)及蛋白含量下降（P<0.01），E.coli+Dex組均明顯高于LPS+Dex組（P<0.01）。（3）E.coli組和LPS組血清和BALF中TNF-α及IL-1β的含量均顯著高于NS組（P<0.01），LPS組血清中TNF-α及IL-1β含量均明顯高于E.coli組（P<0.05），而E.coli組BALF中TNF-α及IL-1β含量均明顯高于LPS組（P<0.01），LPS+Dex組血清和BALF中TNF-α及IL-

9、1β含量均低于LPS組（P<0.05），E.coli+Dex組血清和BALF中FNF-α及IL-1β含量無(wú)明顯變化（P<0.05）。（4）LPS組和E.coli組NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞比值（34.08±3.82，36.33±4.05）明顯高于NS組（3.11±1.10，P<0.01），LPS+Dex組NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)（26.14±3.91）較LPS組明顯降低（P<0.01），而E.coli+Dex組（35.1±4.22）較E.coli

10、組無(wú)明顯變化（P>0.05）。
　　 結(jié)論：1.氣道內(nèi)注入大腸桿菌成功的復(fù)制了肺炎導(dǎo)致的內(nèi)源性急性肺損傷模型。
　　 2.兩模型組雖然在病理?yè)p傷程度上相近，但在具體病理表現(xiàn)上存在一定差異，E.coli組主要表現(xiàn)在肺組織結(jié)構(gòu)的毀損，氣道上皮壞死脫落，而LPS組主要變現(xiàn)為肺泡間隔的增寬和血管充血，肺組織結(jié)構(gòu)破壞不明顯。電鏡下E.coli組病變重于LPS組。說(shuō)明急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展與其致病因素關(guān)系密切，不同病因所致的急性肺損傷