影響富血小板血漿活性的相關(guān)因素分析.pdf

1、目的： 富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)的活性與血小板的濃度和活性密切相關(guān)。本課題通過研究不同離心、儲(chǔ)存方法對血小板計(jì)數(shù)及活性的影響，同時(shí)分析不同激活劑對PRP凝固及釋放生長因子的影響，探討PRP的最佳制備、儲(chǔ)存方法及激活劑的使用，為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 采用四種離心方法(方法一：一次離心力200g，二次離心力200g；方法二：一次離心力200g，二次

2、離心力1200g；方法三：一次離心力1200g，二次離心力200g；方法四：一次離心力1200g，二次離心力1200g)制備PRP，通過血小板計(jì)數(shù)和ELISA法分別檢測PRP中血小板濃度和血漿P選擇素濃度。選擇22℃和-80℃儲(chǔ)存制備的PRP，通過血小板計(jì)數(shù)和ELISA法檢測不同溫度儲(chǔ)存24h后PRP中血小板濃度和血漿P選擇素濃度。血漿P選擇素濃度用相應(yīng)血小板計(jì)數(shù)進(jìn)行歸一化。分別以殼聚糖、凝血酶受體激動(dòng)劑肽6(TRAP)和牛凝血酶作為激

3、活劑，測定富血小板凝膠(platelet-rieh gel，PRG)的體外凝固時(shí)間和血塊凝縮率，并通過ELISA法測定釋放的生長因子TGF-β1和PDGF的濃度。數(shù)據(jù)采用SPSS11.0軟件，行單因素方差分析。 結(jié)果： 不同離心方法制備的PRP中，血小板計(jì)數(shù)明顯高于全血，分別是全血血小板計(jì)數(shù)的4.21，4.94，4.12，4.72倍。其中方法二的血小板計(jì)數(shù)最高，與方法一、三之間的差異有顯著性意義(P<0.01)。PRP中

4、歸一化血漿P選擇素濃度，方法二和四之間無顯著性差異(P>0.05)，但明顯低于方法一和三(P<0.01)。采用方法二制備的新鮮PRP以及經(jīng)過22℃及-80℃儲(chǔ)存24h后PRP的血小板計(jì)數(shù)無顯著性差異(P>0.05)。歸一化后血漿P選擇素濃度22℃儲(chǔ)存和新鮮PRP相比無顯著性差異(P>0.05)：但-80℃儲(chǔ)存明顯高于新鮮PRP(P<0.05)。牛凝血酶組PRG凝固時(shí)間明顯低于TRAP組和殼聚糖組(P<0.01)。加入激活劑后1h，2h，

5、4h后，牛凝血酶組血塊凝縮率明顯大于TRAP組和殼聚糖組(P<0.05)。24h時(shí)，三組PRG血塊凝縮率無顯著性差異(P>0.05)。牛凝血酶組、殼聚糖組和TRAP組分泌的TGF-β1濃度和總量沒有顯著性差異(P>0.05)；TRAP組血漿PDGF濃度和總量明顯高于牛凝血酶組和殼聚糖組(P<0.05～0.01)。 結(jié)論： 采用一次離心力200g10分鐘，二次離心力1200g10分鐘的二次離心法制備的PRP，血小板濃度和回