過氧化氫和維生素E對老年豚鼠耳蝸外毛細胞大電導鈣激活鉀通道作用的實驗研究.pdf

1、瀘州醫(yī)學院碩士學位論文過氧化氫和維生素E對老年豚鼠耳蝸外毛細胞大電導鈣激活鉀通道作用的實驗研究姓名：李林輝申請學位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：黎萬榮20090401濾波(3IOqz)后輸入計算機，采用PClampl01軟件包進行分析處理，并選用以下分析指標：(1)電流幅值(CurrentAmplitude，Am)：(2)開放概率(ProbabilityofOpen，Po)；(3)平均開放時間(MeanOpenTime，To)；

2、(4)平均關(guān)閉時間(MeanCloseTime，Tc)。3鑒別并分析通道通過改變鉗制電壓，觀察并記錄在細胞貼附式和內(nèi)面向外式下BKCa通道開放的電壓依賴性，然后改變浴液中鈣離子的濃度，使其依次達到1O10～mol／L、50x10～mol／L、10x10一mol／L、10x10一mol／L，分別觀察和記錄通道開放的鈣離子敏感性；然后使用BKCa通道阻滯劑2050mmol／L的四乙基胺(tetraelthylarninonium，TEA)，

3、觀察通道電流幅值的變化。4藥物作用觀察(1)本次實驗中浴槽內(nèi)浴液2ml，在形成高阻封接后，采用細胞貼附式記錄，依次向浴槽內(nèi)加入不同濃度的H202，使浴液中的藥物終濃度依次達100黼—OO—gmo!／L一300pmol／L、4009mol／L觀察并記錄不同濃度H202對BKCa通道的作用，然后用不含藥物的浴液灌洗，觀察通道的恢復情況；(2)在觀察到3009mol／LH202對BKCa通道的作用后，不洗脫，加入不同濃度的VitE，使VitE

4、的終濃度分別達到509mol／L、1009mol／L、1509mol／L、2009mol／L，觀察VitE對H202激活的BKCa通道的影響。結(jié)果：1在對稱性高鉀溶液中，內(nèi)面向外式記錄到電導為21845士053pS的外向電流，BKCa的平均開放時間To、開放概率Po隨電壓增加而增加，反轉(zhuǎn)電位為OmV；在浴液中加入不同濃度的鈣離子后，BKCa通道被明顯激活且具有鈣濃度依賴性，Po明顯增加；在加入阻斷劑TEA后，通常電流幅值Am呈濃度依賴性